[发明专利]GLP-1、GIP和Gcg多重受体激动蛋白质

说明书

本发明提供了一种新的蛋白质。经实验证实，所述蛋白质同时具有对GLP‑1(胰高血糖素样肽‑1)、GIP(葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽)和Gcg(胰高血糖素)三种受体的激动活性，且兼具降低血糖和减轻体重作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种可高效减重兼具降糖的多重受体激动蛋白质。

背景技术

糖尿病和肥胖之间联系密切，大约80%的2型糖尿病患者都有肥胖，具有并发性、异质性的特点。

已知GLP-1、GIP和Gcg都是与糖尿病、肥胖等代谢疾病相关的肠促胰素。

胰高血糖素样肽-1受体激动剂（简称GLP-1RA）为糖尿病和肥胖症患者提供了有效、安全的治疗方法，直接作用于胰腺促进胰岛素释放，抑制胰高糖素的分泌，抑制胃蠕动，延缓胃排空，通过对中枢神经系统的作用来抑制食欲，而这些治疗方案的疗效有限，其临床疗效并不能完全满足代谢紊乱病人的需求。

通过在单一疗法中组合多种代谢通路，则可能实现多重作用以改善疗效。

葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽（glucose-dependent insulinotropicpolypeptide，简称GIP）是正常人餐后肠促胰素效应的主要原因，具有与GLP-1不同的功能。GIP通过调节葡萄糖摄取、脂解和脂蛋白酶活性，在脂肪组织糖和脂代谢中发挥重要作用。

胰高血糖素（glucagon，简称Gcg）是在胰腺中产生的肠胃激素，通过刺激肝脏糖异生和糖原分解升高血糖，具有促分解代谢和机体产热增加作用。

现有技术中，糖尿病和肥胖的治疗药物一直专注于针对单一分子靶单独疗效的药物，临床上往往只能使用几种单一靶点的单一作用药物进行联合用药，或者使用这些药物的复方制剂。

研究表明，GLP-1RAs与其它不同的肠胃激素同时给药可显示出协同促进作用，因此，设计并获得单个分子在GLP-1/GIP/Gcg多重受体上具备适当平衡的活性，可同时激活不同信号通路，发挥出协同促进血糖控制、体重减轻以及调节脂质代谢等功能，从而具有疗效最大化、副作用降低、药动学性质更稳定等优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够同时具有对GLP-1（胰高血糖素样肽-1）受体、GIP（葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽）受体和Gcg（胰高血糖素）受体三种受体的激动活性，且能够显著减轻糖尿病人体重兼具降糖的蛋白质。

本发明提供了一种多重受体激动蛋白质（简称GGGF1），其氨基酸序列由SEQ IDNO.2所示。

所述GGGF1蛋白的氨基酸序列中，1-39位是具有活性的功能区，其氨基酸序列由SEQ ID NO.1所示。其余部分是非功能区，起着增加蛋白稳定性的作用。

所述多重受体激动蛋白质以同源二聚体的形式存在。

本发明将所述多重受体激动蛋白质基因构建至表达载体。所述表达载体为真核表达载体，可以通过瞬时转染或稳定转染的方式导入宿主细胞。

所述宿主细胞为哺乳动物细胞。所述哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢（CHO）细胞、人胚肾293细胞。

具体地，本发明进行了如下研究工作：

1、根据GGGF1的氨基酸序列基于CHO细胞密码子的偏爱性设计合成对应的核苷酸序列，将其构建至载体pcDNA3.4中，获得表达载体pcDNA3.4-GGGF1。

2、利用转染试剂将表达载体转染至CHO细胞中，经培养获得表达GGGF1的细胞上清。

3、通过Protein A进行GGGF1的分离纯化，并利用SDS-PAGE电泳进行检测。

4、基于GLP-1受体、GIP受体、Gcg受体检测GGGF1的生物学活性。