[发明专利]一种HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法

权利要求书

1.一种HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，将银纳米粒子沉积在羟基磷灰石HAP上，再将不同人群中采集的体液样本直接滴加在上面，通过表面增强拉曼光谱SERS技术检测获取体液样本的SERS光谱图来有效检测体液样本。

2.根据权利要求1所述的HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)羟基磷灰石HAP的制备

采用水热法制备HAP纳米颗粒；

(2)HAP/Ag的制备

称取干燥好的HAP粉末加入到装有硝酸银的乙醇溶液，超声使其均匀分散；然后将上述悬浊液置于水浴加热的环境中，向其中加入正丁胺，磁力搅拌；待反应结束后，将反应产物离心分离，水洗以及无水乙醇洗涤，最后真空干燥得到HAP/Ag纳米颗粒；将制备好的HAP/Ag涂抹到铝片上作为SERS增强基底；

(3) HAP/Ag的SERS检测

分别用不同人群的体液样本进行SERS测量，在SERS实验中，将不同体液样本滴加到HAP/Ag复合SERS增强基底上；在空气中自然风干，用于SERS测量；在样本的五个不同位置检测由所述不同的体液样本与HAP/Ag复合SERS增强基底产生的SERS信号；

(4) 得到不同体液样本的SERS特征峰

不同体液样本重复步骤（1）到（3）的操作建立不同体液样本表面增强拉曼光谱数据库，采用扣荧光的方法对所述表面增强拉曼光谱数据库进行后处理分析，建立表面增强拉曼光谱分析模型，获得不同体液样本对应的表面增强拉曼光谱的特征峰。

3.根据权利要求2所述的HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，步骤（1）羟基磷灰石HAP的制备具体为：称取1-1.5 g Ca(NO₃)₂•4H₂O溶解于25-50 mL的超纯水中，搅拌10-30 min；称取1-1.3 g的Na₂HPO₄•12H₂O溶解于25-50 mL的超纯水中；将Na₂HPO₄•12H₂O溶液按一分钟滴加一滴的速度滴加到Ca(NO₃)₂•4H₂O溶液中，在滴加的过程中，溶液由澄清逐渐变浑浊，随后用稀硝酸滴定溶液的pH值为2.5，溶液变澄清；接着在溶液中加入5-10 mg的环己烷六羧酸H₆L和1-3 g的CO(NH₂)₂持续搅拌20-50 min；将上述澄清溶液进行水热反应，待反应结束后自然冷却至室温；离心收集产物，用乙醇和超纯水清洗，最后在真空干燥箱中干燥64-72 h，然后研磨成羟基磷灰石纳米颗粒粉末。

4.根据权利要求3所述的HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，所述水热反应具体为100-150℃，反应3-5 h。

5.根据权利要求2所述的HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，步骤（2）HAP/Ag的制备具体为：称取3-7 mg干燥好的HAP粉末加入到装有15 mL, 20mM硝酸银的乙醇溶液，超声25-50 min使其均匀分散；然后将上述悬浊液置于水浴加热的环境中，向其中加入15-30 µL的正丁胺，磁力搅拌30-50 min；待反应结束后，将反应产物离心分离，水洗两次，无水乙醇洗两次，最后真空干燥放于得到HAP/Ag纳米颗粒；将制备好的HAP/Ag涂抹到铝片上作为SERS增强基底。

6.根据权利要求5所述的HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，所述水浴加热温度为30-50℃。

7.根据权利要求5所述的HAP/Ag复合SERS增强基底的体液拉曼光谱检测方法，其特征在于，所述真空干燥具体为30-50℃真空干燥24-48 h。