[发明专利]一种快速测定烟草及烟草制品中葡萄糖含量的连续流动法

说明书

本发明公开了一种快速测定烟草及烟草制品中葡萄糖含量的连续流动法。包括样品前处理、标准工作曲线绘制、样品分析和结果计算。烟草中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将还原性的4‑氨基安替比林与酚偶联缩合成有紫外吸收的醌类化合物，再用连续流动分析仪在480nm处比色测定，依据吸光度与葡萄糖的定量关系即可推算出样品中的葡萄糖含量。该方法专一性强、操作简便快速、分析效率高、准确度和精密度高、稳定性好，能够满足对烟草和烟草制品中的葡萄糖含量进行大批量、快速、准确检测的需要，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于烟草成分检测技术领域，具体是涉及一种运用连续流动分析技术并基于酶促反应对烟草及烟草制品中的葡萄糖含量进行快速准确测定的方法。

背景技术

烟草中的水溶性糖主要为葡萄糖、果糖、蔗糖，是烟草内重要的碳水化合物，在烟草燃吸过程中能调整适度的酸碱平衡，使吃味醇和，增加烟气的和顺性，与烟草品质密切相关。目前烟草行业常用芒森·沃克法(即费林试剂法)和连续流动分析法测定烟草中水溶性的还原糖和总糖，但这些方法测定的都是总量，不能测定单个成分的含量。随着烟草分析技术发展，对糖的分析也不应仅局限于糖类总量的分析，应深入了解各种单糖的含量及其对烟草品质的影响，因此对烟草及烟草制品中葡萄糖等单糖的测定显得愈来愈重要。

目前，对烟草中葡萄糖的测定主要采用离子色谱法、近红外光谱法、气相色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等，但离子色谱法仪器昂贵，维护费用高，且操作繁琐；近红外光谱法必需先建立模型，不能直接用于检测；气相色谱法、高效液相色谱法需衍生化，操作较麻烦，需用固相萃取柱预分离等；毛细管电泳法也需要对糖衍生化或使糖带电，才能进行分离检测。烟草检测技术人员正努力寻找一种更加简便、快速和准确的葡萄糖含量测定方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种运用连续流动分析技术并结合酶促反应实现的，能够快速、简便、准确测定烟草及烟草制品中葡萄糖含量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

一种快速测定烟草及烟草制品中葡萄糖含量的方法，包括以下步骤：

(1)样品前处理

按照“YC/T31-1996烟草及烟草制品试样的制备和水份测定烘箱法”，将烟草或烟草制品置于烘箱中，40℃烘干至可用手指捻碎，取出用粉碎机研磨过40目筛后得到烟末样品，并测定其含水率；取0.1g烟末样品置于三角瓶中，加入20mL水振荡萃取30min后过滤，滤液作为待测样品溶液备用；

(2)样品分析

用连续流动分析仪分析样品溶液，得到葡萄糖仪器观测值：

①试剂：葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂盒中的试剂R₁和R₂；

②流路设置：试剂R₁和R₂经5匝混合圈混合后，与样品溶液经20匝混合圈混合，连续通过2个37℃、10.6mL的加热池在线发生显色反应，然后经由10匝混合圈进入连续流动分析仪；其中，样品溶液用橙/绿泵管，流速为0.10mL/min；试剂R₁和R₂用红/红泵管，流速为0.80mL/min；

③分析仪检测波长：480nm；检测速度：30个样品/h；进样/清洗时间比：1∶1；进样时间60s；基线校正：开通；

(3)绘制标准工作曲线