[发明专利]基于C2c1核酸酶的基因组编辑系统和方法

权利要求书

1.一种用于对细胞基因组中的靶序列进行定点修饰的基因组编辑系统，其包含以下i)至v)中至少一项：

i)C2c1蛋白或其变体，和向导RNA；

ii)包含编码C2c1蛋白或其变体的核苷酸序列的表达构建体，和向导RNA；

iii)C2c1蛋白或其变体，和包含编码向导RNA的核苷酸序列的表达构建体；

iv)包含编码C2c1蛋白或其变体的核苷酸序列的表达构建体，和包含编码向导RNA的核苷酸序列的表达构建体；

v)包含编码C2c1蛋白或其变体的核苷酸序列和编码向导RNA的核苷酸序列的表达构建体；

其中所述向导RNA能够与所述C2c1蛋白或其变体形成复合物，将所述C2c1蛋白直系同源物或其变体靶向所述细胞基因组中的靶序列。

2.权利要求1的系统，其中所述C2c1蛋白是来自Alicyclobacillus acidiphilus的AaC2c1蛋白、来自Alicyclobacillus kakegawensis的AkC2c1蛋白、来自Alicyclobacillusmacrosporangiidus的AmC2c1蛋白、来自Bacillus hisashii的BhC2c1蛋白、来自Bacillus属的BsC2c1蛋白、来自Bacillus属的Bs3C2c1蛋白、来自Desulfovibrio inopinatus的DiC2c1蛋白、来自Laceyella sediminis的LsC2c1蛋白、来自Spirochaetes bacterium的SbC2c1蛋白或来自Tuberibacillus calidus的TcC2c1蛋白。

3.权利要求1的系统，其中所述C2c1蛋白是来自Alicyclobacillus acidiphilus NBRC100859的AaC2c1蛋白、来自Alicyclobacillus kakegawensis NBRC 103104的AkC2c1蛋白、来自Alicyclobacillus macrosporangiidus strain DSM 17980的AmC2c1蛋白、来自Bacillus hisashii strain C4的BhC2c1蛋白、来自Bacillus属NSP2.1的BsC2c1蛋白、来自Bacillus属V3-13contig_40的Bs3C2c1蛋白、来自Desulfovibrio inopinatus DSM 10711的DiC2c1蛋白、来自Laceyella sediminis strain RHA1的LsC2c1蛋白、来自Spirochaetesbacterium GWB1_27_13的SbC2c1蛋白或来自Tuberibacillus calidus DSM 17572的TcC2c1蛋白。

4.权利要求1-3中任一项的系统，其中所述C2c1蛋白包含SEQ ID NO:1-10中任一所示的氨基酸序列，或所述C2c1蛋白的变体包含与SEQ ID NO:1-10中任一所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列相同性的氨基酸序列。

5.权利要求1-4任一项的系统，其中所述向导RNA是sgRNA。

6.权利要求5的系统，所述sgRNA包含由选自SEQ ID NO:31-38或39-75的核苷酸序列编码的sgRNA支架。

7.权利要求1-6中任一项的系统，其中所述C2c1蛋白是其天然基因座不具有CRISPR阵列的C2c1蛋白。

8.权利要求1-7中任一项的系统，其中编码C2c1蛋白或其变体的核苷酸序列经密码子优化。

9.权利要求8的系统，其中所述编码C2c1蛋白或其变体的核苷酸序列选自SEQ ID NO:11-20。

10.一种对细胞基因组中的靶序列进行定点修饰的方法，包括将权利要求1-9中任一项的系统导入细胞中。