[发明专利]一种用于缺血性心脏病基因靶向治疗的载基因显影微泡及其制备方法

权利要求书

1.一种用于缺血性心脏病靶向治疗的载基因显影微泡，其特征在于，所述的载基因显影微泡包括阳离子显影微泡以及分散于显影微泡外壳表面的治疗基因质粒，其中，所述的显影微泡具有正电性的脂质双分子层外壳以及包裹在外壳内部的生物惰性气体，所述的治疗基因质粒包括含有基质金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)和沉默信息调节因子3(SIRT3)基因的质粒。

2.如权利要求1所述的载基因显影微泡，其特征在于，所述的生物惰性气体为C3F8。

3.如权利要求1或2所述的载基因显影微泡，其特征在于，所述的阳离子显影微泡通过以下方法制备得到：

将二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)、DC胆固醇(DC-Chol)按照质量比4-6:1-3:0.1-1的比例进行混合，再加入三氯甲烷使其充分溶解；旋转蒸发仪减压蒸发，去除有机溶剂形成脂膜；在脂膜中加入甘油与PBS混合液，42℃水浴30min-1h，取脂膜和甘油、PBS混悬液加入管形瓶中；冷却后用C3F8置换管形瓶内空气2次，机械震荡，即得高浓度阳离子显影微泡，经60Co伽马射线辐射或紫外线消毒灭菌，正常放置4℃冰箱保存，-20℃冰箱可稳定保存1月。

4.如权利要求3所述的载基因显影微泡，其特征在于，二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)、DC胆固醇(DC-Chol)按照质量比5:2:0.5的比例进行混合。

5.如权利要求3所述的载基因显影微泡，其特征在于，旋转蒸发仪50℃减压蒸发。

6.如权利要求3所述的载基因显影微泡，其特征在于，甘油与PBS混合液中甘油与PBS的体积比为1:9。

7.如权利要求1所述的载基因显影微泡，其特征在于，所述的载基因显影微泡通过以下方法制备得到：

分别制备含有人SIRT3或TIMP-3基因的质粒，以真核表达载体pCDNA3.1做为骨架载体；先将制备好的阳离子显影微泡高频震荡60S，按0.06ml/kg体重计算并获取相应体积的阳离子显影微泡，再按28.5μg/kg体重计算并获取相应体积的含有人SIRT3或TIMP-3基因质粒，如超过微泡最大结合率，则按微泡最大结合率计算即100ul阳离子微泡与40μg质粒结合，与准备好的微泡溶液混合，加0.9％生理盐水稀释至50ml，室温下孵育20min，制得含有人SIRT3或TIMP-3基因的载基因显影微泡制剂。

8.权利要求1-7任一项所述的载基因显影微泡在制备缺血性心脏病靶向治疗的药物制剂中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的治疗所采用的手段为超声波靶向微泡击碎技术。