[发明专利]一种基于叶绿素荧光图像分析的灌浆期耐热油菜筛选方法

权利要求书

1.一种基于叶绿素荧光图像分析的灌浆期耐热油菜筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)油菜角果的选取：将各待筛选的油菜在常规条件下种植；标记同一天开花的花朵；在油菜种子油脂快速积累时期取若干偶数个角果，每个油菜材料所取角果平均分为两组；

(2)油菜角果的再培养：并将所有组角果分别以角果柄插入植物培养基，各装有油菜角果的容器分别放入适温组和高温组植物生长箱或生长室中进行角果离体培养；角果离体培养环境设置；

(3)耐高温油菜的筛选：从各经一定时间温度处理的油菜角果样品中分离灌浆期种子；将分离出的种子进行暗适应；将待测种子置于叶绿素荧光成像系统的样品台，在同一界面下对多个适温组和高温组灌浆期种子进行叶绿素荧光图像采集和叶绿素荧光参数测定；计算对应高温组种子叶绿素荧光参数F_v/F_m(PSII反应中心的最大光量子产量)较适温组种子F_v/F_m下降比率R_Fv/Fm，筛选出R_Fv/Fm(R_Fv/Fm叶绿素荧光参数F_v/F_m较适温组种子F_v/F_m下降比率)较小的油菜植株为灌浆期高温耐受性较强的油菜；

所述下降比率R_Fv/Fm的计算公式为：

其中，F_v/F_m(适温)为适温组种子的F_v/F_m，F_v/F_m(高温)为高温组种子F_v/F_m。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述R_Fv/Fm5％。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤(1)中标记同一天开花的花朵为在盛花期标记同一天开花的花朵；所述油菜种子油脂快速积累时期为开花后20～25天。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤(2)中角果离体培养环境为：环境湿度50％～70％；每天光照时间不少于12小时。

5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于：所述每天光照时间为14～16小时。

6.根据权利要求4或5所述的筛选方法，其特征在于：所述适温组温度设置在15℃～25℃之间，光照时段的温度不低于黑暗时段；高温组的温度需始终不低于相应时间适温组的温度，并在光照时段进行35℃～42℃的高温处理，高温处理时间每天5～10小时，各样品连续处理时间不超过3天。

7.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤(2)中的暗适应为在黑暗处放置20min以上。

8.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述叶绿素荧光图像采集和叶绿素荧光参数测定时每一被检样品选择3个及以上区域，分析选定区域的F_v/F_m，取平均值作为对应样品的叶绿素荧光参数F_v/F_m。

9.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述角果叶绿素荧光图像采集和叶绿素荧光参数测定复进行2～3次，并将每次叶绿素荧光参数F_v/F_m测量值的平均值作为对应材料的F_v/F_m。