[发明专利]一种微流控芯片和微流控芯片的使用方法

说明书

一种微流控芯片和微流控芯片的使用方法。所述微流控芯片包括微流道，以及至少一个内嵌于微流道中的双层微粒捕获腔室；各双层微粒捕获腔室包括第一微粒捕获腔室和位于其下方的第二微粒捕获腔室，且第一微粒捕获腔室的底部与第二微粒捕获腔室的顶部相互连通；第一微粒捕获腔室底部截面直径大于第二微粒捕获腔室顶部开口截面直径；且第二微粒捕获腔室顶部开口截面直径小于底部截面直径。所述使用方法，包括在使用微流控芯片捕获微粒后，向该芯片中通入分散有用于微粒裂解的固体颗粒的油相，以包封和裂解所述微粒。使用本发明的芯片和方法，可有效防止捕获的微粒因后续操作导致的溶液扰动而再次溢出，并能够防止捕获腔室之间信息的交叉污染。

技术领域

本发明涉及微流控芯片领域，具体涉及一种微流控芯片和微流控芯片的使用方法。

背景技术

细胞是生命组成及生命活动的基本单位。复杂生命体通过细胞之间相互协作实现复杂的生命功能。但是传统基于群体的细胞生物学研究方法平均化了细胞的信息，掩盖了细胞之间的异质性以及稀少细胞的信息，使人们无法清晰的认识每个细胞在生命体中扮演的不同角色。随着高通量测序以及微流控技术的进步，单细胞测序技术也得到了巨大的进展，使人们能够揭露细胞之间的异质性有了更全面的了解。从单细胞水平进行分析，能够使人们对细胞活动，疾病产生与治疗以及生命的本质的理解提供更丰富和可靠的信息。

目前对单细胞测序技术来说，面临着单细胞个体小，很难高效快速分隔单细胞；物质含量低，物质在分析处理过程中很容易损失等挑战。

微流控芯片又称为芯片实验室，指的是一种将化学和生物等实验中涉及到的样品的前处理、样品的分离、反应、检测、分析、输送、贮存等步骤集成到一块只有平方厘米级别的微型芯片上的操作平台上。它由于具备的体积小、试剂消耗少、通量高、分析速度快、和集成化等优点在单细胞分析方面有着广泛的应用。

但是现在的单细胞测序技术在分隔细胞时，依然存在着大量单细胞丢失，需要复杂的仪器精准操控，成本高等问题。比如在Cell上发表的文章(Macosko et al.,2015,cell:161,1202-1214；Klein et al.,2015,Cell 161,1187-1201)报道的液滴微流控与编码微球相结合的方法，通过泊松分布实现细胞与编码微球的配对。但是这种基于泊松分布方式的配对方法只能分析大量细胞样品中少量细胞的分析，存在着大量的细胞损失。并且该方法需要精准的仪器对流体进行操控实现微液滴的生成，增加了样品制备的复杂度，并且也增加了成本。

除了使用液滴微流控，还有一些利用微阵列的方法对细胞或者微球进行分隔。比如发表在Science上的文章(Fan et al.,2015,science:347,1258367)，以及相对应的专利(Fan et al.,WO 2015031691)通过泊松分布的方式将细胞分隔在微阵列中，并且在阵列中与编码微球进行配对，实现了大量单细胞基因表达的同时分析。比如发表在NatureMethods上的文章(Gierahn et al.,2017,Nature Methods:14,395-398)以及相对应的专利(Gierahn et al.,US 2019/0144936)，通过泊松分布的方式将细胞分隔在微阵列中，并且在阵列中与编码微球进行配对。与Cyto-Seq不同的是，该方法通过将一张半透膜覆盖着芯片表面，阻止了mRNA分子扩散，增加了编码微球对mRNA分子的捕获效率。比如发表在Cell上的文章(Han et al.,2018,Cell:172,1091–1107)，通过泊松分布的方式将细胞分隔在微阵列中，并且在阵列中与编码微球进行配对，实现了单细胞水平上的图谱分析。