[发明专利]万古霉素完全抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了万古霉素完全抗原及其在万古霉素特异性单克隆抗体制备和免疫法检测中的应用。本发明还公开了用该完全抗原制备的抗万古霉素单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及用于检测万古霉素的检测卡和检测试剂盒。本发明公开了检测万古霉素的ELISA法和荧光免疫层析法，本发明的荧光免疫层析法具备操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好等优点。

技术领域

本发明涉及小分子药物的检测。具体地说，本发明涉及万古霉素完全抗原、利用该完全抗原获得的万古霉素单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测万古霉素中的应用。

背景技术

近年，由于临床抗菌药物广泛应用及不合理使用导致细菌的耐药问题的日益严重。为对抗迅速增长耐药菌，许多制药公司都积极研发新的抗菌药。万古霉素是治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌所致的重症感染包括败血症、肺部感染、皮肤软组织感染的疗效确切又比较安全的抗生素。对于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌院内肺部感染，万古霉素为首选药物。现在，在多个国家出现的“超级细菌”可以抵御几乎所有抗生素，目前最好的抗生素是替加环素和万古霉素。

然而，抗菌药物在治愈并挽救了无数患者生命的同时，也因抗菌药物的不合理应用也会造成耐药菌增加的不利后果。不合理用药是事关全人类健康的大事，是全世界所有国家普遍存在的问题。我国药物的不合理情况亦非常严重，据国家食品药品监督管理局通报，每年至少有20万人因用错药、用药不当而死亡，40％死于抗菌药物应用不合理。合理用药的问题一直是专业人士和公众关注的热点。

因此，对患者有必要进行血药浓度的监测，以确保药物的有效治疗，优化万古霉素的临床使用，减少耐药菌株的产生及不良反应的发生。要达到此目的需建立简便、快速、灵敏、可靠的万古霉素定量检测方法。

目前，万古霉素的检测主要包括高效液相色谱法、免疫分析法和液质联用技术等。高效液相色谱法是最早用于测定万古霉素血药浓度的方法，该法具有准确、灵敏、廉价的特点，但该法操作繁琐、重现性较差、难以实现自动化检测，且测定时间较长，检测浓度有限。近年来虽然国内外一直出现试图在进行对高效液相色谱法测定精神类药物血药浓度的技术改进，如直接蛋白沉淀法结合反相液相色谱法、固相萃取结合高相液相、直接蛋白沉淀结合色谱质谱联用等，但仍存在各自的局限。此外，免疫分析法也是万古霉素检测的常用方法。荧光偏振免疫法在十多年前就被开发成商品化的仪器，实现了自动化检测。但其最大的缺陷在于专属性不强，测定时易受代谢物的干扰。酶放大免疫法，该技术监测血药浓度具有较好的精密度和准确度，虽已实现商品化，但由于其费用太高，给患者带来沉重的经济负担，导致临床上推广使用困难。

影响免疫分析法检测质量的根本原因是抗体的特异性与亲和性，这些性质又取决于免疫半抗原的分子结构，所以免疫半抗原分子设计与选择是产生特异性抗体和建立小分子药物含量快速检测技术最关键的步骤。

因此，本领域急需万古霉素的完全抗原，以及通过该完全抗原获得的万古霉素特异性抗体。

发明内容

本发明的目的在于提供万古霉素的完全抗原，通过该完全抗原可以获得万古霉素的特异性抗体。

本发明的另一目的在于提供通过本发明的万古霉素完全抗原获得的万古霉素特异性抗体以及包含该抗体的检测试剂盒和定量测定万古霉素的方法。

在第一方面，本发明提供一种万古霉素完全抗原，所述完全抗原具有式I所示的结构：

式中，R为任选取代的C1-C6烷基；优选任选取代的C2-C4烷基；

Protein为蛋白质载体。

在具体的实施方式中，所述完全抗原具有式II所示的结构：

式中，Protein为蛋白质载体。