[发明专利]一种增加应激性海藻糖含量的耐热性黑曲霉工程菌的构建方法在审
| 申请号： | 202011411844.7 | 申请日： | 2020-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN114107358A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 张雷达;杨倩;赵伟;何庆;刘新茹;任倩 | 申请（专利权）人： | 德州汇洋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12P7/58;C12R1/685 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 王敏 |
| 地址： | 253100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 增加 应激 海藻 含量 耐热性 曲霉 工程 构建 方法 | ||
1.一种增加应激性海藻糖含量的耐热性黑曲霉工程菌的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)利用一步克隆法，在质粒pAN7-1的基础上添加cox启动子和TtrpC终止子，获得重组载体pAN7-1-cox-TtrpC；所述cox启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述TtrpC终止子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
(2)利用一步克隆法，构建基因tpsA和tpsB异源表达质粒pAN7-1-cox-tpsA-linker-tpsB-TtrpC；所述tpsA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，所述tpsB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；
(3)将所述质粒pAN7-1-cox-tpsA-linker-tpsB-TtrpC转化到宿主菌中，获得重组工程菌FG(tpsAB-linker+)；
(4)利用同源重组技术敲除ATH1基因，获得高耐热性产葡萄糖酸钠的黑曲霉基因工程菌株ΔATH1-FG(tpsAB-linker+)。
2.根据权利要求1所述的一种增加应激性海藻糖含量的耐热性黑曲霉工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述linker为根据黑曲霉密码子偏好性设计的柔性肽W1、W2和W3序列，刚性肽P1、P2和P3序列。
3.根据权利要求1所述的一种增加应激性海藻糖含量的耐热性黑曲霉工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(3)所述宿主菌为黑曲霉出发菌株FG-2。
4.权利要求1或2所述的耐热性黑曲霉工程菌在高温条件下生产葡萄糖酸钠的应用。
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