[发明专利]靶向外泌体针剂的保存、运输及针剂制备方法

权利要求书

1.一种靶向外泌体针剂的制备方法，其特征在于：包括以下制备步骤：

步骤一：通过基因工程获取细胞靶向肽修饰的lamp2b重组质粒，将lamp2b重组质粒转染小鼠的未成熟树枝状细胞，转染24-48h后，加入抗生素，筛选，得到靶向肽修饰的细胞系；

步骤二：将靶向肽修饰的细胞系在DEME培养基中增值，收集上清，2000g离心15-45min，离心后收集1ml上清，加入外泌体提取试剂盒，4℃过夜，加入100-150μl PBS，混匀，10000g离心30-90min，弃上清，用300-500μl PBS重悬，获得外泌体；

步骤三：将外泌体和治疗药物用包被缓冲液混匀后，常温下1KV、20ms电穿孔，得到靶向外泌体药剂；

步骤四：用蛋白浓度测定试剂盒测量靶向外泌体药剂的蛋白浓度；

步骤五：将靶向外泌体药剂封装入安瓿瓶，得到靶向外泌体针剂。

2.根据权利要求1所述的一种靶向外泌体针剂的制备方法，其特征在于：步骤一中，所述抗生素为puro抗生素或G418抗生素。

3.根据权利要求1所述的一种靶向外泌体针剂的制备方法，其特征在于：步骤二中，所述外泌体提取试剂盒采用SBI外泌体试剂盒，Total Exosome Isolation试剂盒，或Invitrogen Ambion miRNA试剂盒，或Life Technologies外泌体提取试剂盒中任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种靶向外泌体针剂的制备方法，其特征在于：步骤三中，所述包被缓冲液为0.05mol/l碳酸盐缓冲液，包被缓冲液的pH为9.6。

5.根据权利要求1所述的一种靶向外泌体针剂的制备方法，其特征在于：步骤四中，所述蛋白浓度测定试剂盒采用BCA蛋白浓度测定试剂盒，待检测的靶向外泌体药剂的体积为10μl。

6.根据权利要求1所述的一种靶向外泌体针剂的制备方法，其特征在于：步骤五中，所述安瓿瓶使用前用0.1％的盐酸或5％的醋酸水溶液灌满，再经100℃真空热处理30min后，依次经加压喷射气水洗涤处理和100℃真空干燥20min处理。

7.一种如权利要求1-6所述的靶向外泌体针剂的保存、运输方法，其特征在于：包括以下保存步骤：

a.将靶向外泌体针剂制备后立刻置于4℃保持30min；

b.将向外泌体针剂置于冻存管中-20℃下保持2h；

c.将冻存管置于-80℃下保持24h；

d.将冻存管置于液氮罐中长期储存。

8.根据权利要求7所述的一种靶向外泌体针剂的保存、运输方法，其特征在于：所述冻存管从液氮中取出后立即投入恒温水浴箱中，复融，取出靶向外泌体针剂并转移至无菌管或转运袋中，使用4℃恒温保温箱在24h内运输至使用单位。

9.根据权利要求8所述的一种靶向外泌体针剂的保存、运输方法，其特征在于：所述恒温水浴箱的温度为20℃。