[发明专利]评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的方法

权利要求书

1.一种评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的方法，所述方法包括：

(1)确定生物分子拟阈值还原水平L_th；

(2)测定所述细胞培养介质上清液的还原水平L_d；和

(3)比较L_d与L_th以判断还原风险的存在，其中，若L_d大于或等于L_th，则表示有还原风险。

2.如权利要求1所述的方法，其中，确定生物分子拟阈值还原水平L_th包括：

建立梯度稀释还原水平；和，确定使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平和未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平；

其中，使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平或未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平被作为所述拟还原阈值水平L_th。

3.如权利要求2所述的方法，其中，建立梯度稀释还原水平可包括：

收集细胞；

裂解细胞；

获得细胞裂解上清液；和，

梯度稀释细胞裂解上清液，建立不同梯度稀释还原水平。

4.如权利要求3所述的方法，其中，确定使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平和未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平包括：

测试各梯度稀释细胞裂解上清液的还原水平；

测试生物分子在各梯度稀释细胞裂解上清液中还原与否；和，

确定使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平和未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平。

5.如权利要求1所述的方法，其中，还原水平由还原指示剂指示。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述还原指示剂包括选自下组的那些：还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH、二氯酚靛酚DCPIP、活细胞破碎率及其任意组合；具体地，所述还原指示剂包括选自下组的那些：细胞培养介质上清液中的NADPH含量、DCPIP在细胞培养介质上清液中的显色程度、细胞培养介质中的活细胞破碎率，及其任意组合；具体地，还原水平可通过以下方式来确定：(a)测定细胞培养介质上清液中的NADPH含量；(b)测定DCPIP在细胞培养介质上清液中的显色反应程度；(c)测定细胞培养介质中的活细胞破碎率；或(d)上述(a)-(c)的任意组合。

7.一种控制细胞培养介质或细胞培养介质上清液中生物分子还原的方法，所述方法包括：

(1)确定生物分子拟阈值还原水平L_th；

(2)测定所述细胞培养介质上清液的还原水平L_d；和

(3)比较L_d与L_th以判断还原风险的存在，其中，若L_d大于或等于L_th，则表示有还原风险；和，

(4)在有还原风险时，向细胞培养介质或细胞培养介质上清液施用抗还原措施。

8.如权利要求7所述的方法，其中，所述防还原措施选自下组：通气、降温、添加弱氧化剂、添加过氧化氢、添加硫氧还蛋白还原酶抑制剂，及其任意组合。

9.选自下组的一种或多种物质：用于检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH的试剂、二氯酚靛酚DCPIP、用于检测活细胞破碎率的试剂，及其任意组合，在评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险中的用途。

10.选自下组的一种或多种物质：用于检测NADPH的试剂、DCPIP、用于检测活细胞破碎率的试剂，及其任意组合，在制造用于评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的产品中的用途。