[发明专利]一种镉离子全细胞生物传感器电路放大的构建方法有效
| 申请号： | 202011407100.8 | 申请日： | 2020-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN112725373B | 公开（公告）日： | 2023-02-07 |
| 发明（设计）人： | 贾晓强;刘腾;马玉冰 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/78 | 分类号： | C12N15/78;C12N15/65;C12Q1/6897;C12Q1/02;C12R1/40 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 王丽 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 离子 细胞 生物 传感器 电路 放大 构建 方法 | ||
1.一种镉离子全细胞生物传感器电路放大的构建方法；其特征是，以质粒pCDFDuet-2、pGN68为载体，利用检测元件CadR、报告元件mCherry、cadO操纵子以及T7RNAPmut放大模块，按照cadR-Pcad-RBS-T7RNAPmut+PT7-cadO-RBS-mcherry的基因电路顺序通过PCR进行组装，得到镉离子全细胞生物传感器p2T7RNAPmut-68；检测质粒包括一个由镉特异性蛋白调控启动子PcadSEQ ID No.1、镉特异性结合蛋白CadR基因SEQ ID No.2及T7RNAP第40位氨基酸由谷氨酸(GAG)突变为终止子(TAG)的T7RNAmutSEQ ID No.4为核心元件组成的检测质粒；报告质粒包括一个由T7启动子PT7SEQ ID No.5、cadO操纵子SEQ IDNo.6及红色荧光蛋白mCherry基因SEQ ID No.3为核心元件组成的报告质粒。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是，包括如下步骤：
(1)由镉特异性蛋白调控启动子PcadSEQ ID No.1、镉特异性结合蛋白CadR基因SEQIDNo.2及T7RNAP第40位氨基酸由谷氨酸(GAG)突变为终止子(TAG)的T7RNAmutSEQID No.4为核心元件组成的检测质粒及一个由T7启动子PT7SEQ ID No.5、cadO操纵子SEQID No.6及红色荧光蛋白mCherry基因SEQ ID No.3为核心元件组成的报告质粒；
(2)利用恶臭假单胞菌P.putida KT2440作为宿主，将重组质粒转入宿主中，得到镉离子全细胞生物传感器底盘细胞及经电路放大的镉离子全细胞生物传感器底盘细胞。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是，对镉离子全细胞生物传感器的性能检测方法，以P.
putida KT2440为宿主菌，通过对底盘细胞的生长曲线、时间-荧光响应、浓度-荧光响应及特异性的四项性能进行检测，得到传感器对镉离子检测的性能。
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