[发明专利]一种木犀属专用引物及快速鉴定木犀属物种的方法

权利要求书

1.一种木犀属物种鉴定的专用引物，其特征在于：目标基因区域为rpl32与trnL基因间隔区，其具体引物序列如下：

rpl32-trnL F=SEQ ID NO.1=5’-TTGGAATAATCTGAATCTGAATCGACTTGAC-3’

rpl32-trnL R=SEQ ID NO.2=5’-TAAGTATCCGATAATACTCAAGTTC-3’。

2.应用如权利要求1所述木犀属物种专用引物快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取待测样品DNA；

2）使用rpl32-trnL引物对，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增；

3）PCR产物利用1.5%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，根据扩增产物的有无判断待测样品是否为木犀属物种。

3.根据权利要求2所述的快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，所述步骤1中，使利用天根生化科技有限公司的高效植物基因组DNA提取试剂盒（DP305）完成待测样品的DNA提取。

4.根据权利要求2所述的快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，所述步骤2中，25μLPCR扩增反应体系包括：2μL DNA模板；1μL正向引物；1μL反向引物；12.5μL Mix；7.5μLDDH₂O。

5.根据权利要求2所述的快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，所述步骤2中，PCR扩增反应程序为：预变性95-99℃ 2min；30循环，95-99 °C 1min，57-58 °C 1min，70-74 °C1min；延伸70-74℃ ，5-10min。

6.根据权利要求2所述的快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，所述步骤2中，PCR扩增反应程序为：预变性97℃ 2min；30循环，97 °C 1min，57.3 °C 1min，72 °C 1min；延伸72℃ 7min。

7.根据根据权利要求2所述的快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，所述步骤3中，琼脂糖凝胶电泳的制胶比例为：30mL TBE 1× ；0.45g琼脂糖；3μL核酸染料。

8.根据权利要求2所述的快速鉴定木犀属物种的方法，其特征在于，所述步骤3中，根据待测样品PCR产物判断其是否为木犀属物种。