[发明专利]一株乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明公开了一株乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株ABC01，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19178。本发明将乙基麦芽酚的完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化，通过颈背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。经过间接竞争酶联免疫法筛选细胞并三次亚克隆，最终得到一株单克隆抗体杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对乙基麦芽酚具有较好的特异性和检测灵敏度，可实现对油脂、牛奶等食品中乙基麦芽酚残留量的检测，为食品中乙基麦芽酚残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株ABC01及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

乙基麦芽酚（Ethyl maltol，EM）是一种可以通过人工合成的香精香料，因其低量高效、安全无毒的特点被广泛用于食品、饮料、香烟、日用化妆品等领域的增甜、增香、保香和掩盖异味。尽管乙基麦芽酚是我国规定允许使用的一种较为理想的食用香料添加剂，但国家对其使用范围也有明确规定，其中植物油脂、巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳中不得添加香精香料，2020年《国家食品安全监督抽检实施细则》也把乙基麦芽酚列入食用植物油检测项目。考虑到大量摄入也会导致头痛、呕吐，并可能影响肝功能和肾功能，联合国粮食与农业组织和世界卫生组织食品添加剂专业委员会规定：乙基麦芽酚人均每天的摄入量以体重计不能超过 2 mg·kg^-1，而食品加工中的指导用量为100～200 μg·kg^-1。近年来，一些不法商家在利益的驱使下违规向食品中添加乙基麦芽酚进行调香、调色，以达到以次充好、以假乱真的目的，例如向普通油脂中添加乙基麦芽酚冒充高档油，向牛奶中添加乙基麦芽酚掩盖奶腥味等，这些“香精奶”、“香精油”不仅扰乱了行业的正常发展，更是严重损害了消费者的健康权益。因此，建立快速有效的检测乙基麦芽酚含量的方法具有重要意义及市场价值。

目前对食品中乙基麦芽酚的检测主要采用仪器分析方法，包括高效液相色谱法、气液色谱法、液质联用法、气质联用法、紫外分光法、拉曼光谱法等。这些方法具有较高的灵敏度和稳定性，但仪器设备昂贵，对操作人员专业性要求高，检测过程较为繁琐、复杂，无法满足大批量样本现场分析的检测需求。近年来，基于抗原抗体特异性结合的免疫分析技术在食品安全检测分析领域快速发展，其不仅抗基质干扰能力强，能够一定程度上简化样本前处理过程，还具有高通量、低成本和耗时短的特点，无需专业人员。建立一种针对EM的高效、快速酶联免疫检测方法（ELISA）对于维护食品行业发展秩序，保障人民生命健康权益十分必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对乙基麦芽酚的高灵敏度的特异性单克隆抗体。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株制备的抗体对乙基麦芽酚具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立乙基麦芽酚的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株ABC01，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19178。

乙基麦芽酚单克隆抗体，其由所述保藏编号为CGMCC No.19178单克隆细胞株ABC01分泌产生。

所述乙基麦芽酚单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中乙基麦芽酚残留的分析检测。

本发明提供的乙基麦芽酚单克隆抗体杂交瘤细胞株ABC01的制备基本步骤为：

（1）半抗原的衍生：

乙基麦芽酚半抗原EM-1的合成：将乙基麦芽酚（CAS: 4940-11-8）与溴丁酸乙酯反应，再用NaOH水解即得到乙基麦芽酚半抗原EM-1；