[发明专利]一种枯草芽孢杆菌发酵产物中菌体蛋白的制备及防治应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌发酵产物中菌体蛋白的制备方法，其特征在于，所述的枯草孢杆菌菌株为DR-22，菌株保藏号为CGMCC NO：19784，包括以下制备步骤：

(1)菌株活化，将低温保存的枯草芽孢杆菌置于平板培养基上活化，在26℃下培养24h，制得活化菌株；

(2)扩增培养，将步骤(1)制得的活化菌株再次接种于100mlLB液体培养基中，在29℃下，150r/min振荡培养12h，制得种子液；

(3)发酵培养，将步骤(2)制得的种子液按照1％的接种量接种于固体培养基中进行发酵，在30℃下，200r/min进行恒温培养，当观察至其活孢子数≥1000亿/克时，停止发酵，制得具有防治烟草花叶病毒病的枯草芽孢杆菌菌剂；

菌体蛋白的制备，还包括以下步骤：发酵菌体、烘干、粉碎过筛、浸提沉淀、等电点酸沉淀、离心收集沉淀、干燥去除水分、得到菌体蛋白，其发酵菌体在39℃下烘40h，烘干后粉碎并60目过筛；

在浸提沉淀中用正己烷以1:5的料液比，对菌体粉进行浸提沉淀，时间为3h，之后过滤，保留沉淀物为脱脂后菌体蛋白，重复3次；

在等电点酸沉淀中用3mol/L HCl溶液调节5倍稀释沉淀后的蛋白质溶液pH值至3.80，静置40min后，在3500r/min的转速下离心处理15min，收集沉淀，干燥为低温干燥，干燥温度为28℃，干燥时间72h。

2.根据权利要求1的制备方法制备的菌体蛋白的防治应用，其特征在于，用于对于烟草花叶病毒病的防治，不仅防治烟草花叶病毒病，还能够提升烟草生长。