[发明专利]一种快速检测旋毛虫肌幼虫的检测试剂盒

说明书

本发明提供一种快速检测旋毛虫肌幼虫的检测试剂盒，属于光谱学和生物领域。包括银溶胶、石英片和拉曼光谱仪，采用盐酸羟胺络合法制备银溶胶，将待测样品和制备的银溶胶以一定比例混合均匀后，滴于石英片上，待烘干后，使用confocal Raman microspectrometer激光共聚焦拉曼光谱仪检测。所获得的拉曼光谱通过主成分分析和线性判别分析，实现对旋毛虫肌幼虫感染的定性检测。优点是检测试剂盒操作简单、耗时短、需要样品量小，特异性和灵敏度高，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于光谱学和生物领域，特别涉及一种快速检测旋毛虫肌幼虫的检测试剂盒。

背景技术

旋毛虫是一种线虫，可寄生于多种动物体内，包括人和多种哺乳动物，是重要的人兽共患寄生虫病的病原。目前，人生食或半生食肉类感染旋毛虫的事件时有发生，严重威胁公共卫生安全，同时，也会影响正常的肉类进出口贸易，造成经济损失。旋毛虫目前是生猪屠宰检验中强制检验项目。

目前对于屠宰动物旋毛虫病的检验，国际通用方法为镜检法和集样消化法。然而以上两方法均存在一定的弊端，镜检法费时费力而且敏感性差，其敏感性为每克待检肉样中含3条虫体时方可检出。集样消化法虽可大大提高检出率，将虫体检出率提高至每克肉样中1条虫体，但该方法仍十分繁琐，因为集样消化法以20头份为一组份，在发现阳性样品时仍需对阳性组采用镜检法进行逐头镜检。从敏感性的角度来看，由镜检法和集样消化法所造成漏检的肉类均存在安全隐患并可引起人类的感染。同时，这两种方法无法应用于活猪的旋毛虫检测。免疫学方法如ELISA是目前最为敏感的方法，其敏感性可达每克肉样中0.01条虫体，但由于目前所广泛选用的检测抗原主要来源于虫体(如ES抗原和虫体粗抗原等)，存在组分复杂、不利于大规模生产、制备过程繁琐等弊端，此外，还存在严重的交叉反应，因此免疫学方法始终未被纳入法规方法。因此亟需建立一种操作简单、快速、灵敏、无损的旋毛虫检测方法。

表面增强拉曼光谱散射(Surface Enhanced Raman Scattering,SERS)是指当某些分子吸附到具有纳米级的贵金属粒子表面时，得到的拉曼散射信号就会增强上百万倍，由此得到的光谱被称为“表面增强拉曼光谱”。采用SERS技术，可以利用少量血清，即可得到整体血清变化情况，从而可以实现活体检测，不会影响后续贸易。另外，由于SERS具有“分子指纹”的特征，可以很好的反映细微的变化，实现旋毛虫肌幼虫的检测。因此非常适合于生物领域的研究。

发明内容

本发明提供一种快速检测旋毛虫肌幼虫的检测试剂盒，以解决现有的检测技术费时费力、且需要配备专业技术人员的问题。

本发明采取的技术方案是：包括银溶胶、石英片和拉曼光谱仪，其中：

所述银溶胶的制备方法如下：常温下将9mL0.1M氢氧化钠溶液加入到10mL6×10^-2M盐酸羟胺溶液中，混匀后，快速加入到180mL 1.11×10^-3M硝酸银水溶液中，搅拌至均匀，生成灰白色溶胶，10000rpm 10min离心，弃去上清，取下层溶胶；

所述的石英片为波数范围300-1500cm^-1内无明显拉曼峰的基底石英片；

所述的石英片亦可由玻璃片代替；

所述的拉曼光谱仪为confocal Raman microspectrometer激光共聚焦拉曼光谱仪。

所述的拉曼光谱仪检测条件为：激光波长785nm，收集30s，累积2次，波数范围是300-1500cm^-1。

应用上述试剂盒进行旋毛虫肌幼虫检测的方法，包括以下步骤：

1)将待测样品与银溶胶以1:1的比例混合均匀；

2)将步骤1)混匀后的样品在4℃孵育1.5-2h；