[发明专利]原位检测醌氧化还原酶荧光探针的设计、合成及活性研究

权利要求书

1.NQO1小分子荧光探针的合成路线及方法：

试剂和条件：(a)3，3-二甲基丙烯酸，CH3SO3H，70℃，(b)NBS，丙酮，水，rt，(c)碘乙烷，乙腈，82℃，(d)吲哚-3-羧醛，CH3OH，65℃，(e)化合物2，DMAP，EDC.HCl，rt；

化合物1的合成：

称取1mmol质量为152mg的三甲基氢醌加入5ml的无水甲磺酸中，然后加入1mmol质量为100mg的3，3-二甲基丙烯酸，混合物在85℃下搅拌反应2小时，随后冷却至室温，加入大量水，用3*100ml的二氯甲烷提取粗产物，结合有机相，用水洗涤3次，随后用无水Na₂SO₄干燥，真空下除去溶剂，用二氯甲烷作为洗脱剂，柱层析得化合物1，得到180mg的白色固体，产率为76％；

化合物2的合成：

称取1.08mmol质量为252mg的化合物1加入丙酮∶水＝5∶1的6ml的混合溶液中，随后称取1.08mmol质量为234.8mg的N-溴代丁二酰亚胺(NBS)加入，室温搅拌2.5小时后，用3*100ml的乙酸乙酯提取粗产物，结合有机相，用水洗涤3次，随后用无水Na₂SO₄干燥，真空下除去溶剂，石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1柱层析，得到118mg的淡黄色固体，产率为47％；

化合物3的合成：

称取5.4mmol质量为500mg的对甲基吡啶溶于适量乙腈中，随后加入5.4mmol质量为850mg的碘乙烷，82℃搅拌反应12小时，然后真空下除去溶剂，加入适量乙醚超声震荡，析出固体，抽滤得到540mg的白色固体，产率为89％；

化合物4的合成：

称取2mmol质量为290mg的化合物3溶于适量甲醇中，随后加入2mmol质量为245mg的3-吲哚甲醛，65℃下搅拌反应5分钟，随后加入200μl的哌啶，然后65℃搅拌反应12小时，反应完成后冷却至室温，加入400ml的乙酸乙酯搅拌，析出固体，抽滤得到600mg的褐色固体，产率为80％；

化合物5的合成：

称取0.8mmol质量为200mg的化合物2溶于适量二氯甲烷，随后加入1.5倍当量的100mg的DMAP，152mg的EDC.HCl，冰水浴活化1.5小时，然后加入0.8mmol质量为200mg的化合物4，常温搅拌反应6小时，反应完成后冷却至室温，真空除去溶剂，二氯甲烷∶甲醇＝20∶1柱层析，得到165mg的褐色固体，产率为43％。