[发明专利]尼帕病毒TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种尼帕病毒TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒及其应用，其中包含的引物和探针序列如下：正向引物NiV‑qF:5’‑TCTCCCAGAGTCTATCAGTAAGG‑3’；反向引物NiV‑qR:5’‑CCATACCAGTTTCCTCGACATAG‑3’；探针NiV‑Probe:FAM‑5’‑AGGATCTGCTAAAGGCAGAGCAGT‑3’‑BHQ1。本发明还提供了运用上述试剂的体外荧光PCR检测尼帕病毒的方法，可以快速准确地检测尼帕病毒。本发明建立的尼帕病毒荧光PCR检测方法具有操作简便，高效、快速、特异的优点；该方法的建立，对样本的检测只需2小时左右即可完成，灵敏度可以达到14.8 copies/μL，填补了国内检测尼帕病毒的空白。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的涉及一种以尼帕病毒(Nipah virus,NiV)N基因为靶标建立针对尼帕病毒cDNA的TaqMan探针荧光定量PCR(qPCR)检测试剂盒及其应用。

背景技术

尼帕病毒(Nipah virus,NiV)为有囊膜单股负链RNA病毒，副黏病毒科，亨尼病毒属，具有宿主范围广、致死率高的特点，于1998年首次在马来西亚被发现，尼帕病毒感染是一种人兽共患的自然疫源性疾病，曾经在新加坡、马来西亚、印度等国家爆发，给养猪业造成了巨大经济损失，世界卫生组织在2018年将尼帕病毒列为对公共卫生造成严重威胁的有限疾病名单。目前全球爆发的尼帕病毒感染来源于同一株病毒株，在传播过程中由于遗传变异进化出：马来西亚株和孟加拉株Niv-Malaysia(Niv-M)NiV-Bangladesh(NiV-BD)。与马来西亚株相比，Niv的孟加拉株引起的器官病理变化更严重，死亡率高于马来西亚株，但只有一个血清型。该病毒安全级别为生物安全四级实验室(BSL-4)病原，一般实验室不具备病毒的分离鉴定条件。尼帕病毒可造成人、猪、马、猫犬等多种动物发生严重神经性脑炎或呼吸系统疾病，人感染尼帕病毒后若不能对症治疗，死亡率达到40％-70％。猪感染尼帕病毒后表现为呼吸急促、发展成呼吸困难并伴随非自主性咳嗽。

研究表明，果蝠(Fruit bats)是尼帕病毒的天然宿主，其传播可跨越物种障碍，通过病毒溢出的方式感染人和其他哺乳动物，主要通过食源性途径和中间宿主感染，是引起人和猪尼帕病毒感染的主要媒介生物；此外，猪捡食了果蝠吃剩的带毒果实而导致感染，人接触猪后也感染患病。曾在马来西亚新加坡爆发的尼帕病毒感染，患者与猪有过密切接触，主要是一些在猪场工作的工作人员和屠宰场工人，表明猪是该病毒传播途径中重要的中间宿主，另外将猪场建在果蝠栖息地边缘也可以直接导致病毒传入猪群。就目前来说，尼帕病毒的传播方式有两种：病毒由果蝠等野生动物传给猪，猪再传给人(马来西亚式)；或野生动物通过莫种途径直接传染给人(孟加拉式)。另外有调查指出由于果蝠的活动范围主要集中在不丹、文莱、印度、印度尼西亚、老挝、马达加斯加、缅甸、尼泊尔、菲律宾、巴布亚新几内亚、新加坡、泰国、越南包括中国，这些国家虽然没有发生过尼帕病毒疫情，但发现这些地区的果蝠体内存在尼帕病毒。因此这些国家仍是有极大的感染风险的国家，中国又是养猪大国，因此尼帕病毒的防控至关重要。