[发明专利]一种检测大鼠外周血HDAC5表达水平的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提供一种检测大鼠外周血HDAC5基因表达的试剂盒及其使用方法，通过该试剂盒，筛选孕期感染青春期子代外周血单核细胞HDAC5表达量明显上调的大鼠继续饲养至成年期进行行为检测(开放旷场实验、Y迷宫实验以及前脉冲抑制效率(PPI))，结果显示，HDAC5显著升高的大鼠其成年期行为也显著异常，如焦虑水平增加、记忆缺陷及感觉门控功能障碍等，据此推断本试剂盒可以有效评估孕期感染青春期子代的模型质量，并用以后续研究。

技术领域

本发明属于外周血检测技术领域，具体涉及一种检测大鼠外周血HDAC5表达水平的试剂盒及其使用方法。

背景技术

通过制备孕期感染子代大鼠模型，检测青春期(出生后35天)及成年期(出生后56天)海马、前额叶皮质及外周单核细胞中HDAC5的表达水平，并结合行为学分析，发现外周血单核细胞中HDAC5升高早于异常行为出现，故而，可将HDAC5作为评估孕期感染子代大鼠模型质量的早期外周标记分子。但在检测HDAC5表达水平时操作较为繁琐，因此，急需一种可检测大鼠外周血单核细胞HDAC5表达水平的试剂盒。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种检测大鼠外周血HDAC5表达水平的试剂盒及其使用方法，具体方案如下：

一种检测大鼠外周血HDAC5表达水平的试剂盒，该试剂盒所包含的试剂及使用说明如下表所示：

表中：引物Ⅰ：GTCGAAAGGATGGCACTGTT(HDAC5上游)

引物Ⅱ：AGCCAGTAAAGCCGTTCTCA(HDAC5下游)

引物Ⅲ：GGAGCGAGATCCCGTCAAGA(GAPDH上游)

引物Ⅳ：CACAAACATGGGGGCATCAG(GAPDH下游)。

一种基于上述试剂盒的使用方法，其包括如下操作流程：

第一步：外周血单核细胞的分离

取肝素抗凝血5mL，沿管壁徐徐滴流叠加在盛有5mL溶液a的试管内，应注意保持两者界面清晰，在室温下以2000r/min的速度离心20min，用毛细吸管轻轻吸出乳白色的单核细胞；

第二步：单核细胞RNA的抽提

步骤(1)：收集到的单核细胞加入1000μL的溶液b，室温放置5min；

步骤(2)：加入200μL的溶液c，涡旋混匀15sec；

步骤(3)：室温放置10min后，在4℃的环境下，12000g离心15min；

步骤(4)：取上清，加入等体积的溶液d，颠倒混匀10余次；

步骤(5)：室温静置10min，在4℃的环境下，在4℃的环境下，12000g离心15min；

步骤(6)：弃上清，加入1mL 75％溶液e(溶液e使用溶液f稀释配置)，洗涤沉淀RNA；

步骤(7)：4℃，7500g离心5min，重复步骤(6)-步骤(7)；

步骤(8)：弃上清，于超净工作台中干燥5min；

步骤(9)：加入适量溶液f(20～50μL)溶解RNA，置于55℃水浴10min，转弹管壁，离心；

步骤(10)：用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度，确保OD260/280比值在1.8-2.0之间；

步骤(11)：根据测定浓度稀释，用溶液f稀释2μg RNA至20μL体系即为上样模板；