[发明专利]长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开一种长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒和检测方法，其中，长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒包括第一探针、第二探针和第三探针中的至少一种，所述第一探针、所述第二探针和所述第三探针用以显色原位杂交检测长链非编码RNA BC002811；所述第一探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述第二探针的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述第三探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒的步骤简单，容易操作，且检测准确性较高，适于临床应用推广。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒和检测方法。

背景技术

胃癌是全球最致命的恶性肿瘤之一，早期症状隐匿、缺乏特异性，常被 患者忽略。多数患者在确诊时已处于晚期，且常伴有淋巴结、血行或腹膜转 移，失去了手术根治的机会。因此，迫切需要寻找新的检测方法用于胃癌的 疾病诊断和预后评估。

长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类不编码蛋白质的内源性RNA转录本，长度大于200个核苷酸，可在转录及转录后水平调控基因表达，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡和衰老等重要的生物学过程。研究表明，lncRNA在胃癌发生、发展、转移、耐药及预后中均具有重要作用，可能成为胃癌的诊断标志物、治疗靶点或预后分子标志物。其中，lncRNA BC002811被发现在胃癌组织呈明显的表达上调，其表达水平与胃癌微血管密度呈正相关，可促进胃癌MKN-45细胞侵袭和迁移等功能，具有重要的临床意义。

目前lncRNA表达水平检测常用的方法有lncRNA表达谱芯片、高通量测序、Northern印迹杂交、实时定量PCR(qPCR)、荧光原位杂交(Fluorescence in situhybridization，FISH)等。其中，lncRNA表达谱芯片、高通量测序以及 Northern印迹杂交技术多用于科研，不适于临床推广。由于循环中稳定存在的lncRNA数量较少，qPCR检测的临床应用受限。而FISH技术则存在评估肿瘤形态学特征比较困难，需要借助荧光显微镜及相应的分析系统，花费较高，荧光信号容易衰减，切片保存困难等缺陷，临床推广困难。因此，现今还未有适合临床推广的检测BC002811表达水平的方法。

上述内容仅用于辅助理解发明的技术方案，并不代表承认上述内容是现有技术。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒和检测方法，旨在解决现有的BC002811检测方法在临床应用受限的技术问题。

为实现上述目的，第一方面，本发明提出一种长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒，该试剂盒包括：

用以显色原位杂交检测长链非编码RNA BC002811的第一探针、第二探针和第三探针中的至少一种；所述第一探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述第二探针的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述第三探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

可选地，所述第一探针的5’端和3’端分别连接非荧光标记物；所述第二探针的5’端和3’端分别连接非荧光标记物；所述第三探针的5’端和3’端分别连接非荧光标记物。

可选地，所述第一探针的5’端和3’端分别连接地高辛标记；所述第二探针的5’端和3’端分别连接地高辛标记；所述第三探针的5’端和3’端分别连接地高辛标记。

可选地，所述长链非编码RNA显色原位杂交试剂盒还包括消化液、保护液、固定液、增效剂、洗脱液、预杂交液、多种缓冲液、封闭液、酶标记的特异性结合非荧光标记物的抗体和显色液。

第二方面，本发明还提出一种长链非编码RNA显色原位杂交检测方法，包括如下步骤：

(1)组织切片与显色原位杂交长链非编码RNA BC002811的第一探针、第二探针和第三探针中的至少一种杂交；