[发明专利]一种糖原累积病Ⅰb型基因点突变小鼠模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种糖原累积病Ⅰb型基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括使SLC37A4基因点突变的杂合子小鼠与其他品系的野生型小鼠进行杂交，筛选F1代中杂合子突变小鼠，再经过F1代自交筛选得到F2代中SLC37A4基因点突变纯合子突变小鼠。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述SLC37A4基因点突变使SLC37A4基因编码的蛋白质p.Gly149Glu氨基酸序列发生点突变；

优选地，所述蛋白质p.Gly149Glu氨基酸序列发生点突变包括，第149位的甘氨酸突变为谷氨酸、第28位精氨酸突变为半胱氨酸、第115位甘氨酸突变为精氨酸或第191位脯氨酸突变为亮氨酸。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述SLC37A4基因点突变包括SLC37A4基因第446位核苷酸由G突变为A，点突变后SLC37A4基因核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，或者所述点突变包括SLC37A4基因第446位核苷酸由G突变为A的同时，同时第447位核苷酸由A突变为G。

4.权利要求1-3任一项所述的构建方法，其特征在于，通过基因编辑方法获得SLC37A4基因点突变的杂合子小鼠。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述基因编辑方法包括，采用CRISPR-Cas9方法得到SLC37A4基因点突变的杂合子小鼠。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的CRISPR-Cas9方法包括，将载有编码Cas9 mRNA和sgRNA的DNA序列的载体，与SLC37A4基因点突变donor oligo序列注射入小鼠受精卵后移植代孕，筛选生产出的小鼠得到SLC37A4基因点突变的杂合子小鼠；

优选地，所述Cas9 mRNA序列包括SEQ ID No.3所示序列；

优选地，所述donor oligo序列包括SEQ ID No.4所示序列；

优选地，通过基因测序的方法进行筛选；

优选地，所述基因测序所使用的上游引物和下游引物分别包括SEQ ID No.5和SEQ IDNo.6所示序列；

优选地，所述载体包括pRP[CRISPR]-hCas9-U6。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述的sgRNA序列为反向引导序列，包括SEQ ID No.7所示序列。

8.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述的SLC37A4基因点突变的杂合子小鼠品系包括C57BL/6品系。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述的其他品系的野生型小鼠品系包括C57BL/6或DBA/2；优选为DBA/2品系。

10.权利要求1-9任一项所述的构建方法得到的小鼠模型在由SLC37A4基因缺陷引起的糖原累积病Ⅰb型药物开发中的应用。