[发明专利]一种（R）-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的合成方法

权利要求书

1.一种(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的合成方法，其特征在于，它包括以下步骤：

(1)将化合物III、异丙醇和水加入系统一中，调节混合溶液的pH值至5～7，在酮还原酶和辅酶NADP的存在下，于20～55℃进行酶催化反应，得到含化合物II的物料；所述酮还原酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

(2)将氰化钠与水混合均匀后，在0-10℃的条件下，加入硫酸调节混合溶液的pH值至6～7，得到氢氰酸反应液；将步骤(1)中得到的含化合物II的物料转移至系统二中，与所述氢氰酸反应液进行混合，再加入硫酸调节混合后的反应液的pH值至6～7；在卤醇脱卤酶的存在下，于20～40℃进行酶催化反应，制备化合物I；所述卤醇脱卤酶的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示，氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；

具体合成路线如下：

所述系统一包括反应釜一(1)、膜反应器一(2)和分离装置(5)，所述系统二包括反应釜二(6)和膜反应器二(7)；

所述反应釜一(1)的上方设有填料塔(18)，所述反应釜一(1)下部设有的出料口一(15)通过管路与所述膜反应器一(2)的进液口一(21)相连，所述膜反应器一(2)的出酶口一(22)通过三通阀一(3)分别与所述反应釜一(1)的活性酶入口一(12)和所述分离装置(5)的失活酶入口(51)相连，所述出酶口一(22)与所述三通阀一(3)中间的管路上设有用于测定酶活性的测酶装置一(23)，所述分离装置(5)设有失活酶出口(52)；

所述膜反应器一(2)的出液口(24)通过管路与所述反应釜二(6)的加料口二(61)相连，所述反应釜二(6)下部设有的出料口二(65)通过管路与所述膜反应器二(7)的进液口二(71)相连，所述膜反应器二(7)的出酶口二(72)通过三通阀二(8)分别与所述反应釜二(6)的活性酶入口二(62)和所述分离装置(5)的失活酶入口(51)相连，所述出酶口二(72)与所述三通阀二(8)中间的管路上设有用于测定酶活性的测酶装置二(73)。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述化合物III、酮还原酶和辅酶NADP的质量比为2.5～6.5:1:0.03～0.12，优选为3～6:1:0.05～0.1；所述化合物III与异丙醇的质量比为2.0～6.0:1，优选为2.6～5.2:1；在酶催化反应制备化合物II的过程中，调节pH值至5.5-6；所述化合物III与水的质量比为0.3～0.9:1，优选为0.4～0.8:1。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，在步骤(1)中，反应温度为22～50℃，优选为35～45℃；反应时间为10～24h，优选为15～20h。

4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述氰化钠的质量为氰化钠和水的总质量的25～35％，优选为30％；所述化合物III与氰化钠的质量比为1:0.9～1.5，优选为1:1～1.1；所述化合物III与卤醇脱卤酶的质量比为5.5～6.5:1，优选为6:1；在配制所述氢氰酸反应液的过程中，调节pH值至6.2-6.7；在酶催化反应制备化合物I的过程中，调节pH值至6.2-6.7。

5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，在步骤(2)中，反应温度为22～35℃，优选为30～35℃；反应时间为10～24h，优选为15～20h。

6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，待骤(2)中酶催化反应成后，将得到的含化合物I的物料采用管道萃取器进行萃取。