[发明专利]一种小分子活性肽在诱导hUC-MSCs分化方面的应用

说明书

本发明公开了一种小分子活性肽在诱导hUC‑MSCs分化方面的应用，所述小分子活性肽为(D‑ALA2)‑亮氨酸脑啡肽，所述分化指向神经元样细胞分化。本发明发现，小分子活性肽(D‑ALA2)‑亮氨酸脑啡肽具有诱导hUCMSCs向神经元样细胞分化的活性，且具有浓度效应。因此，(D‑ALA2)‑亮氨酸脑啡肽可以用于制备诱导hUCMSCs向神经元样细胞分化的培养基。

技术领域

本发明属于干细胞领域，涉及干细胞诱导分化，具体一种小分子活性肽在诱导hUC-MSCs分化方面的应用。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)是一类来源于发育早期中胚层、具有多向分化及自我更新潜能的成体干细胞。MSCs的来源主要包括骨髓、脂肪、脐带、胎盘、羊膜等。其中，人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)因取材方便、来源广泛、免疫原性低且不受伦理学争议等众多优势，成为最具潜力的种子细胞。

研究显示，hUC-MSCs具有广阔的临床应用前景，可用于治疗神经系统疾病、肝肾损伤、自身免疫疾病、心脏疾病、骨科疾病、心血管疾病、糖尿病等。

诱导hUC-MSCs向神经元样细胞分化可以用于脊髓损伤等神经损伤相关疾病。

发明内容

本发明是为了提供一种小分子活性肽在诱导hUC-MSCs分化方面的应用。

技术方案：

一种小分子活性肽在体外诱导hUC-MSCs分化方面的应用，其中：所述小分子活性肽为(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽，所述分化指向神经元样细胞分化。

一种小分子活性肽在制备体外诱导hUC-MSCs向神经元样细胞分化的培养基方面方面的应用，所述小分子活性肽为(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽。

技术效果：

本发明发现，小分子活性肽(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽具有诱导hUCMSCs向神经元样细胞分化的活性，且具有浓度效应。因此，(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽可以用于制备诱导hUCMSCs向神经元样细胞分化的培养基。

附图说明

图1为人脐带间充质干细胞倒置显微镜观察结果；可见细胞呈梭形，呈漩涡状生长，符合人脐带间充质干细胞的生长特点。

图2为各组继续培养8d后倒置显微镜下观察结果；可见含有20μM或50μM小分子活性肽的加药诱导组可见明显的神经元样细胞，而正常对照组不明显。

图3为Westernblot检测结果；与正常对照组相比，含有20μM或50μM小分子活性肽的加药诱导组NSE蛋白显著升高，且小分子活性肽的浓度越高NSE蛋白含量越高。

具体实施方式

一、实验材料

人脐带间充质干细胞购自上海传秋生物科技有限公司。

胎牛血清、DMEM/F12(1:1)培养基购自购自美国Gibco公司。

小分子活性肽为(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽，序列为H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-OH(CAS号：64963-01-5)，购自源叶生物，纯度99％。

二、实验方法

1、人脐带间充质干细胞的培养、传代、形态观察和表型检测