[发明专利]经修饰的宿主细胞的建立方法

权利要求书

1.一种通过使用哺乳动物细胞作为宿主细胞产生希望得到的蛋白质的方法，所述方法包括培养所述细胞以允许表达所述希望得到的蛋白质，并回收所述希望得到的蛋白质，其中所述哺乳动物细胞是用于重组蛋白质生产而建立的细胞系，并且除了所述希望得到的蛋白质的基因外，还能够稳定表达APES(抗体产生增强序列)和两种以上的编码蛋白质的外来基因，其中所述APES由SEQ ID NO：2、3、5和6中的任何一个编码。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述外来基因编码两种以上蛋白质，所述蛋白质选自两种以上蛋白质的下述组合：

(1)两种以上转运子；

(2)两种以上对转运子功能必要的辅助蛋白质；

(3)两种以上酶蛋白质；

(4)两种以上转运子与1种或两种以上酶蛋白质；

(5)1种或两种以上转运子与两种以上酶蛋白质；和

(6)1种转运子和1种酶蛋白质。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述外来基因编码两种以上蛋白质，所述蛋白质选自两种以上蛋白质的下述组合：

(1)TauT(牛磺酸转运子)和AE(阴离子交换剂)；

(2)ALT(丙氨酸氨基转移酶)和PC(丙酮酸羧化酶)；和

(3)TauT，ALT和PC。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述外来基因编码选自TauT，AE，ALT，PC，半胱氨酸亚磺酸脱羧酶(CSAD)和X-盒结合蛋白(XBP-1)的两种以上蛋白质。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述APES由SEQ ID NO：2编码。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述希望得到的蛋白质是抗体。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述两种以上外来基因编码同时稳定地表达困难的两种以上蛋白质。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述APES是抑制NfkBia(核因子κB抑制剂α)的表达的非编码RNA。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述希望得到的蛋白质的产量是通过在所述宿主细胞中表达所述两种以上外来基因而增加的。