[发明专利]基于PCR-量子点荧光法的肠道菌群核酸检测试剂盒及检测方法有效
申请号: | 202011362598.0 | 申请日: | 2020-11-27 |
公开(公告)号: | CN112458193B | 公开(公告)日: | 2023-04-07 |
发明(设计)人: | 邹耀东;裘惠良;刘娜娜 | 申请(专利权)人: | 杭州千基生物科技有限公司;杭州美联医学股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/6837;C12Q1/04;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/225;C12R1/23;C12R1/01;C12R1/145;C12R1/37;C12R1/42;C12R1/725;C12R1/72 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人: | 万尾甜;韩介梅 |
地址: | 311200 浙江省杭州市萧山*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 pcr 量子 荧光 肠道 核酸 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种基于PCR-量子点荧光法用于肠道菌群核酸检测的成套引物和探针,其特征在于,包括适用于32种肠道菌群检测的扩增引物序列:
16SF1:CCGGAGGAAGGTGGG
16SR1:TGATCCGCGATTACTAG
以及
VVC-F2:CATGCCTGTTTGAGCGTC
VVC-R2:TTGATATGCTTAAGTTCAG
和探针序列由5’端至3’端:
Lbu:GCGAGGGTAAGCGGATCTC
Lre:CGAGAGTAAGCTAATCTCTTA
Lrh:CAACGAGTTGCGAGACCG
Lac:ACAATGGACAGTACAACGAG
Pse:ACAATGGCCGGTACAAAGAG
Lon:GGCCGGTACAAAGAGAAGC
Ado:GCGGATCCCTTAAAACCG
Bth:TACCTGGTGACAGGATGCTA
Bov:ATCCCAAAAACCTCTCTCAG
But:CCTCGCGAGAGTGAGCAAAA
Fae:CAAAACTCAGAAACAACGTCC
Akk:CAGAGGGGGCCGAAGCCGCGA
Eub:CAAAGAGAAGCGAAACCGCGA
Pre:AAAGTCGGATGCCCGTAAG
Rum:TGTTAACAGAGGGAAGCAAAA
Sut:CCCAGAAAACCGATCGTAGT
Ver:GGAAATCCTCAAAACTGGGCT
Cdi:GTAGTACAGAGGGTTGCCAAG
Cpe:TGGTACAGAGAGATGCAATAC
Cop:GAAGCGAAGCGCGAGGTGGA
Dor:CTCGCGAGGGTAAGCAAATCT
EF:GAAACCGCGAGGTGGAGCGAAT
Esa:TGCGTCGTAGTCCGGATTGGAG
Fus:AGTCGCAAAGCTGTGAAGTGG
Pro:ACCTCGCGAGAGCAAGCGGAA
Sal:CGACCTCGCGAGAGCAAGCG
Shi:GCGTCGTAGTCCGGAGGGGA
Vei:CAAACCCCAGAAACAAGCTC
CA:GCAATACGACTTGGGTTTGC
CT:GAATTTAACGTGGAAACTTAT
CK:CGACGTGTAAAGAGCGTCGG
CG:CAGTATGTGGGACACGAGCG
对应的32种肠道菌群依次为:保加利亚乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、假链状双歧杆菌、长双歧杆菌、青春双歧杆菌、多行拟杆菌、卵形拟杆菌、丁酸梭菌、普拉梭菌、艾克曼菌属、真杆菌属、普雷沃氏菌、瘤胃球菌属、萨特氏菌属、疣微菌属、艰难梭状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、粪芽孢菌属、多尔氏菌属、肠球菌属、阪崎肠杆菌、梭杆菌属、变形杆菌属、沙门氏菌、志贺氏菌、韦荣氏球菌属、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌;通过氨基与羧基的缩合反应将探针固定在尼龙膜上,制备成检测肠道菌群的检测芯片,基于PCR-量子点荧光法用于肠道菌群核酸检测。
2.一种基于PCR-量子点荧光法的肠道菌群核酸检测试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1所述的成套引物和探针。
3.如权利要求2所述的基于PCR-量子点荧光法的肠道菌群核酸检测试剂盒,其特征在于,
还包括用于内控检测的内控引物:
IC-F1:ATACAATGTATCATGCCTC
IC-R1:GGCCTAGCTTGGACTCAG
和内控探针:
IC:TGTAACTGATGTAAGAGGTT;
所有探针固定在膜条的特定位置上形成包含探针阵列的检测芯片,所述试剂盒基于PCR-量子荧光法实现。
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