[发明专利]基于PCR-量子点荧光法的肠道菌群核酸检测试剂盒及检测方法有效

专利信息
申请号: 202011362598.0 申请日: 2020-11-27
公开(公告)号: CN112458193B 公开(公告)日: 2023-04-07
发明(设计)人: 邹耀东;裘惠良;刘娜娜 申请(专利权)人: 杭州千基生物科技有限公司;杭州美联医学股份有限公司
主分类号: C12Q1/689 分类号: C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/6837;C12Q1/04;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/225;C12R1/23;C12R1/01;C12R1/145;C12R1/37;C12R1/42;C12R1/725;C12R1/72
代理公司: 杭州求是专利事务所有限公司 33200 代理人: 万尾甜;韩介梅
地址: 311200 浙江省杭州市萧山*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 基于 pcr 量子 荧光 肠道 核酸 检测 试剂盒 方法
【权利要求书】:

1.一种基于PCR-量子点荧光法用于肠道菌群核酸检测的成套引物和探针,其特征在于,包括适用于32种肠道菌群检测的扩增引物序列:

16SF1:CCGGAGGAAGGTGGG

16SR1:TGATCCGCGATTACTAG

以及

VVC-F2:CATGCCTGTTTGAGCGTC

VVC-R2:TTGATATGCTTAAGTTCAG

和探针序列由5’端至3’端:

Lbu:GCGAGGGTAAGCGGATCTC

Lre:CGAGAGTAAGCTAATCTCTTA

Lrh:CAACGAGTTGCGAGACCG

Lac:ACAATGGACAGTACAACGAG

Pse:ACAATGGCCGGTACAAAGAG

Lon:GGCCGGTACAAAGAGAAGC

Ado:GCGGATCCCTTAAAACCG

Bth:TACCTGGTGACAGGATGCTA

Bov:ATCCCAAAAACCTCTCTCAG

But:CCTCGCGAGAGTGAGCAAAA

Fae:CAAAACTCAGAAACAACGTCC

Akk:CAGAGGGGGCCGAAGCCGCGA

Eub:CAAAGAGAAGCGAAACCGCGA

Pre:AAAGTCGGATGCCCGTAAG

Rum:TGTTAACAGAGGGAAGCAAAA

Sut:CCCAGAAAACCGATCGTAGT

Ver:GGAAATCCTCAAAACTGGGCT

Cdi:GTAGTACAGAGGGTTGCCAAG

Cpe:TGGTACAGAGAGATGCAATAC

Cop:GAAGCGAAGCGCGAGGTGGA

Dor:CTCGCGAGGGTAAGCAAATCT

EF:GAAACCGCGAGGTGGAGCGAAT

Esa:TGCGTCGTAGTCCGGATTGGAG

Fus:AGTCGCAAAGCTGTGAAGTGG

Pro:ACCTCGCGAGAGCAAGCGGAA

Sal:CGACCTCGCGAGAGCAAGCG

Shi:GCGTCGTAGTCCGGAGGGGA

Vei:CAAACCCCAGAAACAAGCTC

CA:GCAATACGACTTGGGTTTGC

CT:GAATTTAACGTGGAAACTTAT

CK:CGACGTGTAAAGAGCGTCGG

CG:CAGTATGTGGGACACGAGCG

对应的32种肠道菌群依次为:保加利亚乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、假链状双歧杆菌、长双歧杆菌、青春双歧杆菌、多行拟杆菌、卵形拟杆菌、丁酸梭菌、普拉梭菌、艾克曼菌属、真杆菌属、普雷沃氏菌、瘤胃球菌属、萨特氏菌属、疣微菌属、艰难梭状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、粪芽孢菌属、多尔氏菌属、肠球菌属、阪崎肠杆菌、梭杆菌属、变形杆菌属、沙门氏菌、志贺氏菌、韦荣氏球菌属、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌;通过氨基与羧基的缩合反应将探针固定在尼龙膜上,制备成检测肠道菌群的检测芯片,基于PCR-量子点荧光法用于肠道菌群核酸检测。

2.一种基于PCR-量子点荧光法的肠道菌群核酸检测试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1所述的成套引物和探针。

3.如权利要求2所述的基于PCR-量子点荧光法的肠道菌群核酸检测试剂盒,其特征在于,

还包括用于内控检测的内控引物:

IC-F1:ATACAATGTATCATGCCTC

IC-R1:GGCCTAGCTTGGACTCAG

和内控探针:

IC:TGTAACTGATGTAAGAGGTT;

所有探针固定在膜条的特定位置上形成包含探针阵列的检测芯片,所述试剂盒基于PCR-量子荧光法实现。

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