[发明专利]卵囊壁破壁剂组合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种卵囊壁破壁剂组合物，其特征在于，其包括以下质量百分含量的组份：异丙醇10%～50%、蛋白酶K 0.01%～0.1%、聚乙二醇0.1%～5%、柠檬酸钠0.1%～5%、葡萄糖0.5%～5%、蔗糖0.5%～10%、氯胺T 0.5%～8%、磷酸二氢钠0.1%～0.8%、磷酸氢二钠0.2%～1%、标准PBS缓冲液2%～5%，其余为注射用水。

2.根据权利要求1所述的卵囊壁破壁剂组合物，其特征在于：所述聚乙二醇为聚乙二醇500。

3.一种卵囊壁破壁剂组合物的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：

（1）预备以下质量百分含量的组份：异丙醇10%～50%、蛋白酶K 0.01%～0.1%、聚乙二醇0.1%～5%、柠檬酸钠0.1%～5%、葡萄糖0.5%～5%、蔗糖0.5%～10%、氯胺T 0.5%～8%、磷酸二氢钠0.1%～0.8%、磷酸氢二钠0.2%～1%、标准PBS缓冲液2%～5%，其余为注射用水；

（2）往所述注射用水中加入蛋白酶K、聚乙二醇和柠檬酸钠，搅拌溶解后，获得第一混合物；

（3）往所述第一混合物加入葡萄糖、蔗糖和氯胺T，搅拌溶解后，获得第二混合物；

（4）往所述第二混合物加入异丙醇，搅拌溶解后，获得第三混合物；

（5）往所述第三混合物加入标准PBS缓冲液、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，调节pH至6.8～7.4。

4.根据权利要求3所述的卵囊壁破壁剂组合物的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇为聚乙二醇500。

5.根据权利要求3所述的卵囊壁破壁剂组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的葡萄糖、蔗糖和氯胺T按由前至后的顺序依次加入。

6.一种权利要求1或2所述的卵囊壁破壁剂组合物在卵囊的应用。

7.根据权利要求6所述的卵囊壁破壁剂组合物在卵囊的应用，其特征在于，应用步骤如下：

（S1）获取纯化处理后的卵囊液，然后加入权利要求1或2所述的卵囊壁破壁剂组合物，通过搅拌或涡旋混合，然后静置；

（S2）取静置不同时间段的卵囊悬浮液置于显微镜下，观察卵囊形态变化并与空白组对照分析渗透情况。

8.根据权利要求7所述的卵囊壁破壁剂组合物在卵囊的应用，其特征在于，所述步骤（S1）中的纯化步骤如下：

（Ⅰ）取卵囊液，进行离心、沉淀；

（Ⅱ）除去上清液，加入饱和盐水重悬沉淀，离心；

（Ⅲ）将含有卵囊液的上层液体移入装有注射水的离心管，再次离心，获得卵囊沉淀液；

（Ⅳ）将卵囊沉淀液移入装有注射水的离心管，重复上一步骤几次，最后获得不含有消毒液成分的卵囊液。

9.根据权利要求8所述的卵囊壁破壁剂组合物在卵囊的应用，其特征在于，在所述步骤（Ⅳ）中重复的步骤为三次。