[发明专利]一种可特异性结合猪流行性腹泻病毒的核酸适配体及其用途

说明书

本发明公开了一种可特异性结合猪流行性腹泻病毒的核酸适配体及其用途，属于分子免疫领域。本发明利用SELEX技术，以猪流行性腹泻病毒(PEDV)作为结合抗原从核酸文库中筛选出核酸序列重复率较高的6条核酸适配体，后续通过适配体亲和力测定、适配体特异性检测、平衡解离常数Kd值测定等鉴定出两条结合力最高、特异性良好的核酸适配体，其核心序列分别如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。本发明筛选和制备的猪流行性腹泻病毒(PED virus,PEDV)特异性核酸适配体具有极好的特异性和亲和力，为PEDV抗原检测技术的进一步研究提供了重要技术支撑。

技术领域

本发明属于分子免疫领域，尤其涉及一种可特异性结合猪流行性腹泻病毒的核酸适配体及其用途。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种单链RNA病毒，属于冠状病毒科，冠状病毒属，PEDV的形态特征呈现多形性，以球形为主，大小为95-190nm，其平均直径大约为130nm，外有囊膜，囊膜有花瓣状纤突，纤突长18-23nm，从核心向周围呈放射状分布，大多粒子的中央区域为电子不透明区。PEDV引起的猪流行性腹泻(PED)是一种急性、接触性肠道传染病，其发病特征主要为腹泻、呕吐、脱水。各年龄的猪都可感染发病，但小于7日龄的初生仔猪受害最严重，发病率和死亡率可高达90％～100％。冬春季节是猪流行性腹泻的流行高峰时期，保育猪和育肥猪的群感染率较高，但发病率和死亡率低。当前PEDV是导致仔猪腹泻和死亡的主要原因，每年会给养猪生产造成严重的经济损失。

核酸适配体(简称适配体)是通过指数富集的配体系统进化(systematicevolution of ligands by exponential enrichments，SELEX)技术筛选得到的能够与多种靶物质特异性结合的单链DNA或RNA片段。与抗体相比，核酸适配体具有结合靶物质种类广(病毒、细菌、细胞、蛋白质、多肽、重金属离子等)、免疫原性低、稳定性好、成本低、制备快速简单和易于标记，且分子量小等优势，因此，核酸适配体在生物分子检测、疾病诊断与治疗及药物残留检测等领域具有广泛的应用前景，适配体将成为生物和化学分子探测或检测的传感器领域以及疾病治疗的有力武器。

由于现有检测猪流行性腹泻病毒的方法存在成本高，特异性与敏感性低，不易商品化和批量检测等不同的缺陷，尤其是一些基于抗体建立的检测方法，由于抗体的不稳定性，且制备过程复杂、周期长，影响和限制了相关检测方法的临床应用，而核酸适配体在很多方面优于抗体，可以克服上述缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可特异性结合猪流行性腹泻病毒的核酸适配体。

本发明的目的还在于提供所述猪流行性腹泻病毒核酸适配体的用途。

本发明利用SELEX技术，以猪流行性腹泻病毒(PEDV)作为结合抗原从核酸文库中筛选出核酸序列重复率较高的6条核酸适配体，后续通过适配体亲和力测定、适配体特异性检测、平衡解离常数Kd值测定等鉴定出两条结合力最高、特异性良好的2条核酸适配体。

基于此，本发明采用如下的技术方案：

一种核酸适配体，该核酸适配体的序列为5’-AACCGCCCAAATCCCTAAGAGTC-(N)30-TGTGCGTGTGTAGTGTGTCTGTG-3’；

其中(N)30代表的序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示。

进一步的，所述核酸适配体的核苷酸序列上结合有氨基酸及其衍生物、多肽、蛋白质、维生素、激素、核苷酸、生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料、酶或胶体金。

进一步的，本发明提供所述的核酸适配体在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的应用。

进一步的，本发明提供所述的核酸适配体在制备结合猪流行性腹泻病毒试剂中的应用。

进一步的，本发明提供含有所述的核酸适配体的药物。