[发明专利]一种通过冻融循环回收大豆分离蛋白的方法

权利要求书

1.一种通过冻融循环回收大豆分离蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按1：3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂，并放在通风橱中除去正己烷，将除去正己烷的大豆粉末按1：10(w/w)溶于蒸馏水中，用2M NaOH将pH调节至8.5，并将所得浆液在27℃下机械搅拌2h，随后在9000×g下离心20min，收集上清液并用2MHCl调节pH置4.5，然后在6000×g下离心15min，将获得的沉淀物溶于蒸馏水中，用2M NaOH中和至pH 7.0，在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干，研磨以得到大豆分离蛋白粉末；(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于pH 7.0磷酸盐缓冲溶液中配制成1％～3％(w/v)大豆分离蛋白溶液，室温磁力搅拌2h，在4℃下放置过夜以使蛋白质完全水合，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长；(3)蛋白溶液在温度为-15℃～-35℃的条件下进行冷冻，冷冻时间为6～12h，随后取出在室温条件下进行解冻，待蛋白溶液中心温度达到2～5℃后即完成第1次冻融过程；(4)重复步骤(3)2、4、6、8、10次，完成第1、3、5、7、9、11次冻融过程(5)将冻融处理后的大豆分离蛋白溶液离心后，去除上清液，并将沉淀冻干，称量重量计算即为蛋白回收率。

2.根据权利要求1所述的一种通过冻融循环回收大豆分离蛋白的方法，其特征在于：所述大豆分离蛋白溶液的优选比例为3％。

3.根据权利要求1所述的一种通过冻融循环回收大豆分离蛋白的方法，其特征在于：所述蛋白溶液的优选冷冻温度为-25℃，优选冷冻时间为9h。

4.根据权利要求1所述的一种通过冻融循环回收大豆分离蛋白的方法，其特征在于：所述蛋白溶液在第9次冻融时蛋白回收率最高。