[发明专利]一种用于鉴定奶牛基因型的引物及其应用

说明书

本发明提供了一种用于鉴定奶牛基因型的引物及其应用。本发明的引物包括第一引物与第二引物，其中，第一引物为50～70bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的至少40bp的片段；第二引物为50～70bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的至少40bp的片段。本发明的引物对β‑酪蛋白奶牛特异性较好，很好的扩增效率，可以准确判定奶牛基因型。

技术领域

本发明是关于一种用于鉴定奶牛基因型的引物及其应用，具体而言，是关于一种用于鉴定A1型、A2型β-酪蛋白奶牛的引物，含有所述引物的试剂盒，以及鉴定奶牛β-酪蛋白基因型方法。

背景技术

β-酪蛋白是人乳和牛乳中的一种主要蛋白。牛乳中β-酪蛋白约占总蛋白重量的30％，含有多种人体必需的氨基酸。牛乳中的β-酪蛋白有两种主要的变异型：A1型和A2型。A1型和A2型β-酪蛋白的区别在于第67位的氨基酸不同。A1型β-酪蛋白的第67位为组氨酸，其前7个氨基酸残基可以被裂解产生β-酪啡肽-7。已有研究报道，β-酪啡肽-7可能与婴幼儿的各种疾病有关，例如I型糖尿病和呼吸功能障碍等，并影响中枢神经系统活动。A2型β-酪蛋白的第67位为脯氨酸，无法产生此类裂解。人乳β-酪蛋白的结构与牛乳A2型β-酪蛋白结构较为相似，也无法裂解。除A1型和A2型外，牛乳β-酪蛋白根据其基因不同SNPs还存在A3、B、C、E、F、H1、I等多种变异型。

因此，区分不同型β-酪蛋白牛乳、奶牛具有重要意义。

CN105219839A和CN105018582A均公开了一种检测β-酪蛋白基因型的方法，是利用特异性引物进行PCR，扩增片段经限制性内切酶酶切后，经琼脂糖凝胶电泳的条带结果进行A1和A2型的β-酪蛋白分型，然而有报道该方法成本较高、假阳性率高，后期仍需要进行测序确认。

CN105925717A公开了一种检测A1和A2型β-酪蛋白奶牛的方法，其中是基于beta-casein基因(Ensembl参考序列ENSBTAT00000003409)c.245CA突变，并利用PCR-RFLP技术在上游引物(beta-caseinF)上创造了一个突变位点，设计得到可以扩增产生EcoT22I酶切位点的引物，通过对PCR扩增产物进行酶切并进行凝胶电泳，依据酶切结果鉴定奶牛基因型。该方法酶切后产生的反应产物包含较小的49bp，以及相近的385bp与434bp，容易导致电泳条带区分显示不清晰。

CN107287292B公开了一种同时检测奶牛β-酪蛋白A1、A2、A3、B、C、E、F、H1和I变体型的方法，其中设计了多重PCR扩增引物和多重连接酶检测反应探针。该方法为多重PCR反应，对反应条件要求苛刻。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种用于鉴定奶牛基因型的引物。

本发明的另一目的在于提供所述引物的应用。

一方面，本发明提供了一种用于鉴定奶牛基因型的引物，其包括第一引物与第二引物，其中，第一引物为20～70bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的连续的至少20bp的片段；第二引物为20～70bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的连续的至少20bp的片段。

SEQ ID No.1(5’-3’)：caagagaagtagtgctagaagttggccattgttaaggaactccttgaattaaaaaaacac；

SEQ ID No.2(5’-3’)：cagattttca acatcagtgagagtcaggctctggctttcagtaaagggctcaactggata。

根据本发明的具体实施方案，本发明的用于鉴定奶牛基因型的引物，其中：

第一引物为50～70bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的连续的至少40bp的片段；第二引物为50～70bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的连续的至少40bp的片段。