[发明专利]Trdrs2蛋白及其相关生物材料在调控里氏木霉合成和分泌蛋白能力中的应用

权利要求书

1.敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子的物质在提高里氏木霉（Trichoderma reesei）胞外蛋白分泌量中的应用；

所述Trdrs2蛋白为如下a1）-a4）中任一种：

a1）序列表中序列6所示的蛋白质；

a2）在a1）所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

a3）将a1）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与里氏木霉胞外蛋白分泌量相关的蛋白质；

a4）与a1）具有98％以上同一性且与里氏木霉胞外蛋白分泌量相关的蛋白质；

所述敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子的物质为敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子的DNA片段或含有所述DNA片段的重组载体或含有所述DNA片段的重组细胞。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述编码Trdrs2蛋白的核酸分子为如下c1）-c3）中任一种：

c1）序列表中序列1或序列2所示的DNA分子；

c2）与c1）具有95％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；

c3）在严格条件下与c1）或c2）任一种限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子的DNA片段含有Trdrs2基因上游同源臂和Trdrs2基因下游同源臂，所述Trdrs2基因上游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列3的第1-2000位，所述Trdrs2基因下游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列3的6189-8188位。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子的DNA片段为序列表中序列4所示的DNA片段。

5.一种重组里氏木霉菌的构建方法，包括如下步骤：敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子，得到所述重组里氏木霉菌；所述重组里氏木霉菌的胞外蛋白分泌量高于所述里氏木霉（Trichoderma reesei）。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述敲除里氏木霉（Trichoderma reesei）中编码Trdrs2蛋白的核酸分子的方法为同源重组、随机插入突变或RNAi。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述同源重组中采用的上游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列3的第1-2000位，所述同源重组中采用的下游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列3的第6189-8188位。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述同源重组通过将序列表中序列4所示的DNA片段导入所述里氏木霉（Trichoderma reesei）实现。

9.由权利要求5-8任一所述方法构建得到的重组里氏木霉菌。

10.权利要求5-8任一所述的方法或权利要求9所述的重组里氏木霉菌在制备或合成或表达胞外蛋白中的应用。