[发明专利]一种引物探针组及其应用和一种检测蜜蜂慢性麻痹病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括上游引物、下游引物和TaqMan探针；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述TaqMan探针5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

3.一种权利要求1或2所述的引物探针组在制备检测蜜蜂慢性麻痹病毒试剂盒中的应用。

4.一种检测蜜蜂慢性麻痹病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物探针组。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品、10×RT-PCR buffer缓冲液、MgCl₂、dNTPs、DNA聚合酶、逆转录酶和RNA抑制剂。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为含有目的片段的阳性克隆质粒，所述目的片段如SEQ ID NO.4所示；所述阴性对照品为无核酸酶水。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，在实时荧光RT-PCR的反应体系中的配置为：10×RT-PCR buffer 2μL，25mmol/L MgCl₂ 2μL，2.5mmol/L dNTPs 1.5μL，10μmol/L上下游引物各0.5μL，10μmol/L探针0.5μL，5U/μL DNA聚合酶0.5μL，5U/μL逆转录酶0.5μL，40U/μL RNA酶抑制剂0.5μL，待测样品RNA 2μL，然后加入无核酸酶水9.5μL，使反应总体积为20.0μL。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述实时荧光RT-PCR的反应程序为：50℃反转录30min；95℃预变性5min；95℃变性15s，55～65℃退火30s，共40～45个循环。