[发明专利]一种负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1.1、利用溶剂乳化挥发法制备包裹曲安奈德药物的PLGA微球；

1.2、将步骤1.1制备的包裹曲安奈德药物的PLGA微球溶于0.2M的醋酸壳聚糖/胶原/京尼平溶液，通过冷冻干燥法制备负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜。

2.根据权利要求1所述的负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的制备方法，其特征在于，步骤1.1中明确包裹曲安奈德药物的PLGA微球的缓释性能的步骤为：

1.1.1、通过高效液相色谱测定载药微球的载药率、包封率；

1.1.2、在体外生理食管PH环境下药物的释放曲线。

3.根据权利要求1所述的负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的制备方法，其特征在于，步骤1.2中明确负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的持续给药能力的步骤为：

1.2.1、光/电镜观测复合贴膜表面结构；

1.2.2、HPLC测定生理食管PH环境下复合贴膜的药物的释放曲线。

4.根据权利要求1所述的负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的制备方法，其特征在于，步骤1.1中，制备包裹曲安奈德药物的PLGA微球的具体步骤为：

1.1-1、采用水包油包固体乳化挥发法制备载药微球；

1.1-2、将30mg曲安奈德粉末和270mg PLGA共溶于500μl二氯甲烷中，高速剪切乳化机10000rpm均质1.5分钟，形成S/O溶液；

1.1-3、将此S/O溶液缓慢注入5%的PVA 水溶液中，中等速度的旋涡持续2分钟；

1.1-4、最后将形成的s/o/w乳液迅速转移到0.5% PVA溶液中，磁力搅拌器低速搅拌3h以充分挥发过量的二氯甲烷；

1.1-5、制备完成的载药微球经2500rpm低速离心沉淀，纯化水重悬洗涤两次，最后经过冷冻干燥，制得包裹曲安奈德药物的PLGA微球，-20℃保存，备用。

5.根据权利要求1所述的负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的制备方法，其特征在于，步骤1.2中，制备负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的具体步骤为：

1.2-1、将0.5%的壳聚糖和0.5%的牛跟腱提取去端肽I型胶原蛋白混合溶解于0.2M醋酸中，并加入0.1%的京尼平，予磁力搅拌器混匀；

1.2-2、在步骤1.2-1的复合溶液中另行加入制备完成的包裹曲安奈德药物的PLGA微球，于20℃下交联24h，-20℃预冷冻24h，然后冷冻干燥24h；

1.2-3、用0.1M Na₂HPO₄中和多余醋酸，蒸馏水清洗，再次冷冻干燥，制得负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜。

6.一种负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的用途，其特征在于，用于预防食管ESD术后狭窄。

7.根据权利要求6所述的负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜的用途，其特征在于，包括如下验证步骤：

2.1、将负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜上种植不同来源的细胞，测定细胞活力，HE染色及扫描电镜观测细胞在负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜上的生长情况，明确载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜在体外的生物相容性；

2.2、将负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜与TGFβ1活化的成纤维细胞共培养，检测细胞活化指标的变化，探究负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜对于成纤维细胞转分化的影响机制，从而在体外探讨负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜对于纤维化狭窄的抑制作用；

2.3、在大鼠背部构建皮肤缺损模型，并将负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜移植于创面，观察原位疤痕的愈合收缩情况，免疫组化验证纤维化相关蛋白的变化，从而在体内初步明确负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜对于纤维化疤痕收缩的影响；

2.4、构建猪食管ESD狭窄模型，将负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜包裹于食管金属支架，通过内镜在创面部位释放，使负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜充分黏附创面表面，在不同时间点观察狭窄形成情况，从而验证负载PLGA/曲安奈德微球的复合网状贴膜对于预防食管ESD术后狭窄的影响。