[发明专利]一种人参内源性肽的分离鉴定方法

权利要求书

1.一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

取人参，并提取人参中的内源性肽，得到人参内源性肽样品；

将人参内源性肽样品进行强阳离子交换处理，得到强阳离子交换处理后的样品；

将强阳离子交换处理后的样品进行除盐处理，得到除盐处理后的样品；

将除盐处理后的样品进行质谱鉴定。

2.根据权利要求1所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述取人参，并提取人参中的内源性肽，得到人参内源性肽样品的步骤，具体包括：

将人参的茎叶和/或根部置于乙腈和三氟乙酸的溶液中进行至少一次提取，并经离心，收集上清液，得到人参内源性肽样品。

3.根据权利要求2所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述乙腈和三氟乙酸的溶液中，乙腈的质量分数为40%~60%。

4.根据权利要求2或3所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述乙腈和三氟乙酸的溶液中，三氟乙酸的质量分数为0.05%~0.2%。

5.根据权利要求1所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述将人参内源性肽样品进行强阳离子交换处理，得到强阳离子交换处理后的样品的步骤，具体包括：

将强阳离子交换材料悬浮液，装填进固相萃取柱中后，再依次分别加入洗脱缓冲液和上样缓冲液进行洗涤和平衡，得到SCX-SPE柱；

将人参内源性肽样品溶解于上样缓冲液中，并加载至SCX-SPE柱中，再依次加入洗涤缓冲液和洗脱缓冲液进行洗脱处理，得到强阳离子交换处理后的样品。

6.根据权利要求5所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括浓度为4~6mM的NaH₂PO₄、浓度为400~600mM的NaCl、质量分数为25%~35%的乙腈，其pH为6.5~7.5；所述上样缓冲液包括浓度为4~6mM的NaH₂PO₄、质量分数为25%~35%的乙腈，其pH为2.5~3；所述洗涤缓冲液包括浓度为4~6mM的NaH₂PO₄、浓度为20~40mM的NaCl、质量分数为25%~35%的乙腈，其pH为2.5~3。

7.根据权利要求1所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述将强阳离子交换处理后的样品进行除盐处理，得到除盐处理后的样品的步骤，具体包括：

取一除盐柱，并用甲醇活化除盐柱后，再用三氟乙酸溶液冲净残余甲醇；接着，用三氟乙酸溶液将除盐柱pH调至2~3后，再将强阳离子交换处理后的样品送至除盐柱；然后，用三氟乙酸溶液冲净残余盐类后，再加入乙腈和三氟乙酸的溶液进行洗脱，得到除盐处理后的样品。

8.根据权利要求7所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述除盐柱为Sep-Pak C18除盐柱。

9.根据权利要求1所述的一种人参内源性肽的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤中，质谱鉴定时，一级质谱使用Orbitrap质量分析器，二级质谱使用Ion trap质量分析器。