[发明专利]苹果酸异构体的检测方法

权利要求书

1.苹果酸异构体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提供加标混合溶液：取L-苹果酸1-3重量份、D-苹果酸1-2重量份、马来酸1.5-2重量份和富马酸对照品3-3.5重量份，用流动相溶解并定量稀释制成每1-1.5ml中约含L-苹果酸1-2mg，D-苹果酸10-13μg、富马酸和马来酸各5-7μg/ml的混合溶液加入容量瓶中，摇匀得到混合溶液；

S2、混合溶液色谱检测：用液相色谱法对混合溶液进行梯度检测，混合溶液色谱图中L-苹果酸和D-苹果酸的保留时间分别为11.1min-12.1min，分离度为2.5-3；

S3、改善分离情况检测：改善马来酸峰与D-苹果酸峰之间的分离情况，拟在流动相中加入乙醇进行色谱条件优化，避免流动相中三氟乙酸的量过大导致低检测波长下出现的基线波动，降低三氟乙酸的用量至0.05％-0.06％，提高各峰响应并改善分离度，将流速降低至0.6-0.8ml/min；

S4、一次改善色谱条件检测：混合溶液色谱图中L-苹果酸和D-苹果酸的保留时间分别为12.0min-13.5min，分离度为3.1-3.3；

S5、增量色谱条件检测：将流动相中三氟乙酸的量分别增大至0.1％-0.2％，然后对一次改善色谱条件检测和增量色谱条件检测色谱图进行对比；

S6、二次改善色谱条件检测：进一步提高各峰响应并改善分离度，将流速降低至0.5-0.7ml/min，将进样量提高至100-120μl；

S7、空白溶剂干扰侧视：配制系统适用性溶液和对照品溶液，各取100-130μl注入液相色谱仪，记录色谱图，观察溶剂对异构体D-苹果酸检查的干扰值；

S8、耐用性检测：改变柱温、流动相浓度、流速、检测波长、色谱柱型号或批号，考察上述参数的微小变动对L-苹果酸峰和醋酸钠峰前后分离度、L-苹果酸峰和醋酸钠峰拖尾因子和含量的影响；

S9、溶液澄清度与颜色检测：检测溶液澄清度是否标准，检测颜色是否正常；

S10、不溶性微粒检测：检测溶液中每lml中微粒含量；

S11、检测溶液内细菌内毒素值：检测溶液内堵塞含量；

S12、含量检测：检测药品内其他药物含量总值。

2.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S2中混合溶液色谱检测条件为流动相：正己烷-异丙醇三氟乙酸：85:15:0.1，溶剂：流动相，检测波长：215-217nm，流速：0.8-1ml/min，柱温：35-37℃，进样量：50μl。

3.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S3中改善分离情况检测的条件为流动相：正己烷-异丙醇三氟乙酸：85:15:0.1，溶剂：流动相，检测波长：215-217nm，流速：0.6-0.8ml/min，柱温：35-37℃，进样量：50μl。

4.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S5中增量色谱条件检测条件为流动相：正己烷-异丙醇三氟乙酸：85:12:3:0.2，溶剂：正己烷-异丙醇-乙醇-三氟乙酸，检测波长：215-217nm，流速：0.3-0.5ml/min，柱温：35-37℃，进样量：100μl。

5.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S8中耐用性检测，柱温、流动相浓度、流速、检测波长、色谱柱型号在小范围内变动时，各变动条件下含量的RSD在2.0％-2.20％之间，超过其区间范围内则为不合格。

6.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S9中溶液澄清度与颜色检测，溶液应澄清无色，如显混浊，与1号浊度标准液比较，当浓度更加浓郁时为不合格，如显色，与黄色0.5号标准比色液比较，显色比0.5号标准色更深时为不合格。

7.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S10中不溶性微粒检测每lml中含10μm及10μm以上的微粒数超过25粒时为不合格，含25μm及25μm以上的微粒数超过3粒时为不合格。

8.根据权利要求1所述的苹果酸异构体的检测方法，其特征在于：所述S12中含量检测的总氯量为0.428％-0.474％g/mL，含钠、钾、钙、镁、醋酸钠、L-苹果酸均为标示量的95.0％-105.0％，超过其区间内则为不合格，重新进行检测。