[发明专利]乳制品中骨桥蛋白的分析方法

说明书

本发明提供了一种乳制品中骨桥蛋白的分析方法。该分析方法包括：步骤S1，去除乳制品水溶液中的酪蛋白，得到处理液；步骤S2，调节处理液的pH值至6.5～7.5，得到待测液；以及步骤S3，采用中性涂层毛细管对待测液中的骨桥蛋白进行毛细管电泳法分析。发明人筛选出中性涂层毛细管对乳制品中的OPN进行检测。且鉴于酪蛋白在OPN的出峰位置存在严重的干扰作用，本申请先对乳制品水溶液进行酪蛋白的去除处理后调节pH值得到待测液，然后，利用中性涂层毛细管在该pH值的条件下最大程度的降低疏水性以及静电溶质和管壁间的交互作用，从而最大程度的消除电渗流，进而准确的检测乳制品中的骨桥蛋白，且上述方法操作简便、快捷。

技术领域

本发明涉及乳制品技术领域，具体而言，涉及一种乳制品中骨桥蛋白的分析方法。

背景技术

骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)是存在于母乳中的一种重要蛋白质，归类于细胞外基质蛋白。从结构上看，OPN是一种由约300个氨基酸残基组成的高度磷酸化的酸性糖蛋白，牛乳和人乳中的OPN在氨基酸序列和磷酸化方式上非常相似，都含有特异的RGD(精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸，Arg-Glu-Asp)序列，这个序列对OPN的粘附功能起着重要的作用，并且牛乳和人乳OPN在同一区域都被O-糖基化。人乳中OPN含量约为138mg/L，远高于牛乳(约为18mg/L)中的水平。婴幼儿配方奶粉的目标是实现母乳化，因此可以明确OPN对婴幼儿的生物学影响意义深远。当前市场上的婴幼儿配方乳粉几乎都没有强化OPN，因此OPN作为增强婴幼儿配方乳粉与母乳相似性的潜在候选蛋白，越来越受到婴幼儿配方乳粉制造商的关注，其在乳制品中的定量检测也会逐渐被关注。

目前，婴幼儿配方乳粉中OPN的检测研究较少，其中AOAC开发的质谱法(Analytical method to quantify osteopontin in dairy powders and infantformulas by signature peptide quantification with UHPLC-MS/MS)是基于蛋白组学的原理，特征是使用胰蛋白酶酶解骨桥蛋白，通过质谱检测酶解产生的特异性肽段，来对乳制品中的骨桥蛋白进行鉴定和间接定量的方法。但上述方法仅局限于对未生成美拉德反应产物的乳制品中的骨桥蛋白的定量测定，且检测精度偏低，不能对骨桥蛋白的含量进行有效定量。

此外，由于OPN是一种分泌型、酸性的磷酸化糖蛋白，在乳体系中带负电荷，可与带正电荷的蛋白质通过静电结合形成蛋白复合物，而此蛋白复合物无法通过色谱方法进行解离；因此需要一种高效、便捷的前处理手段，并结合准确的定量方法来检测乳基质中OPN的含量，以保障原料和成品的含量满足要求。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种乳制品中骨桥蛋白的分析方法，以解决现有技术中的乳制品中骨桥蛋白的分析方法难以对OPN进行准确定量的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种乳制品中骨桥蛋白的分析方法，该分析方法包括：步骤S1，去除乳制品水溶液中的酪蛋白，得到处理液；步骤S2，调节处理液的pH值至6.5～7.5，得到待测液；以及步骤S3，采用中性涂层毛细管对待测液中的骨桥蛋白进行毛细管电泳法分析。

进一步地，上述毛细管电泳法所使用的缓冲溶液包括磷酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲溶液、硼砂缓冲溶液、柠檬酸缓冲溶液中的任意一种或多种的组合，优选缓冲溶液的pH值为6.5～7.5，进一步地优选缓冲溶液的pH值为6.8～7.2，优选磷酸盐缓冲溶液包括磷酸二氢钠溶液和磷酸氢二钠溶液。

进一步地，上述待测液的pH值与缓冲溶液的pH值相同。

进一步地，上述毛细管电泳法分析时，工作电压为-5～-30kv，进一步地优选为-8～-12kv；优选检测波长为200～450nm，进一步地优选为210～218nm；优选检测频率为2～18Hz，进一步地优选为2～4Hz。