[发明专利]IV胶原蛋白检测试剂盒

说明书

本发明提供一种IV型胶原蛋白检测试剂，包括试剂1和试剂2，试剂1组成包含：2‑(N‑吗啉)乙磺酸缓冲液：80‑200mM；氯化钠：20‑40g/L；氯化镁：20‑40g/L；氯化钙：20‑40g/L；辛醇硫酸钠：1‑4g/L；氨基丁三醇硫酸十二酯：1‑4g/L；叠氮化钠：0.1g/L；溶剂为纯化水，试剂1的PH为5.5～6；试剂2组成包含：三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液：50‑200mM；羊抗人IV型胶原蛋白抗体包被胶乳颗粒：1‑3％；二辛基磺化琥珀酸钠：1‑4g/L；月桂酰胺丙基羟磺基甜菜碱：1‑4g/L；叠氮化钠：0.1g/L；溶剂为纯化水，试剂2的PH为7.5。本发明试剂检测灵敏度高，线性好，稳定性好,能有效抑制类风湿因子干扰。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种IV胶原蛋白检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

四型胶原蛋白(IVC)属于非原纤维胶原蛋白，是基底膜网状结构的主要成分之一。作为肝细胞基底膜的核心结构，其在肝纤维化形成过程中起主要作用。IVC在肝纤维化时会产生显著变化，在轻度肝损伤合并肝纤维化时，在体内胶原总量增加尚不明显的情况下，血清IVC含量即可显著增加。因此，其含量的变化能较好的反应肝纤维化、肝细胞损伤及程度，是检测肝脏组织病变如肝纤维化的重要指标之一。

目前市场上IVC检测常用的方法有如下几种：酶联免疫检测法(ELISA)、放射免疫分析法、时间分辨荧光免疫分析方法、胶乳免疫比浊法、化学发光法等。其中ELISA需要特定设备，耗时；放射免疫分析技术法需要搭配昂贵的设备，存在放射线辐射和污染等问题；时间分辨荧光免疫分析方法需要用稀有金属进行标记；化学发光法需要特定设备，且仅能一次发光且易受环境干扰；胶乳免疫比浊法属于普通免疫比浊技术的衍生技术，克服了普通免疫比浊技术信号量非常有限的缺点，使抗体体积有了数量级上的增长，大幅提升了可检测性，但该方法也存在不少不足之处，如易受到存在于测试样品中的嗜异性抗体的干扰，尤其是类风湿因子的干扰，从而导致假阳性结果；此外，胶乳微球的粒径大小对试剂的测试性能也会产生较大影响，粒径过大，由于微球表面积跟自身体积比率小，易造成单位体积内抗体包被量小，导致抗原过剩，无法对浓度高的分析物进行检测，粒径过小则胶乳表面积跟自身体积比率大，不易产生凝集现象，导致吸光度变化缓慢，试剂的检测灵敏度降低。

发明内容

针对上述不足，本发明的目的是提供一种检测灵敏度高，线性范围广，稳定性好，能有效抑制类风湿因子干扰的胶乳免疫比浊法IVC检测试剂及其制备方法。

本发明所采用的技术方案为：

一种IV胶原蛋白检测试剂盒，包括试剂1和试剂2；

试剂1的组分和浓度如下：

2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液：80-200mM

氯化钠：20-40g/L

氯化镁：20-40g/L

氯化钙：20-40g/L

辛醇硫酸钠：1-4g/L

氨基丁三醇硫酸十二酯：1-4g/L

叠氮化钠：0.1g/L

溶剂为纯化水，试剂1的PH为5.5～6；

试剂2的组分和浓度如下：

三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液：50-200mM

羊抗人IV型胶原蛋白抗体包被胶乳颗粒：1-3％

二辛基磺化琥珀酸钠：1-4g/L

月桂酰胺丙基羟磺基甜菜碱：1-4g/L

叠氮化钠：0.1g/L

溶剂为纯化水，试剂2的PH为7.5