[发明专利]一种用于检测草莓斑驳病毒的专用引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测草莓斑驳病毒的专用引物，其特征在于，包括正向引物和反向引物；

所述正向引物的核苷酸序列选自如下序列中的一种：

SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5；

所述反向引物的核苷酸序列选自如下序列中的一种：

SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。

2.根据权利要求1所述的用于检测草莓斑驳病毒的专用引物，其特征在于，所述反向引物序列的5′端用Biotin标记。

3.一种检测草莓斑驳病毒的试剂盒，包括权利要求1所述的专用引物。

4.根据权利要求3所述的检测草莓斑驳病毒的试剂盒，其特征在于，还包括具有SEQ IDNO:9所示核苷酸序列的探针。

5.根据权利要求4所述的检测草莓斑驳病毒的试剂盒，其特征在于，所述探针序列的5′端用FAM标记，3′端用C3 space标记，从5′端开始计算，第31个碱基‘T’用-THF-替代。

6.权利要求1所述的专用引物、权利要求3所述的试剂盒在检测草莓斑驳病毒中的应用。

7.一种快速检测草莓斑驳病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测草莓样品的总RNA核酸；

(2)以步骤(1)的总RNA为模板，利用权利要求1所述的专用引物进行逆转录-重组酶聚合酶恒温扩增；

(3)利用琼脂糖凝胶电泳(AGE)方法或者试纸条夹心检测技术对恒温扩增产物进行检测，确定待测草莓样本是否含有草莓斑驳病毒。

8.根据权利要求7所述的快速检测草莓斑驳病毒的方法，其特征在于，步骤(2)中所述逆转录-重组酶聚合酶恒温扩增的反应体系，以总体积为50μL计，包括：10μM的正向引物1.5-2.5μL、5μM的反向引物1.5-2.5μL和10μM具有SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探针0.4-0.8μL。

9.根据权利要求7所述的快速检测草莓斑驳病毒的方法，其特征在于，步骤(2)中所述逆转录-重组酶聚合酶恒温扩增的温度为37-42℃，优选40℃，反应时间为10-20min，优选15min。