[发明专利]血影紫杉醇及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种血影紫杉醇及其制备方法与应用；本发明采用助水溶剂DEN作为PTX溶剂，极大提高PTX的溶解度；DEN与红细胞孵育，获得装载高浓度PTX的血影，且PTX以晶体形式存在；DEN显著提高PEG‑脂肪修饰血影细胞膜表面的效率，从而提高血影的生物相容性。步骤包括(1)制备压积红细胞；(2)用戊二醛固定红细胞；(3)用DEN与步骤(2)所得红细胞孵育，获得表面修饰PEG的血影紫杉醇；(4)对步骤(3)制得血影表面进行RGD修饰。本发明血影紫杉醇所含紫杉醇浓度为20g/L，且紫杉醇以晶体形式存在，具备缓慢释放药物的效果，血影表面PEG修饰防止吞噬细胞清除，提高生物相容性，延长循环时间，血影表面RGD修饰提高靶向新生血管内皮细胞和肿瘤细胞的能力。

技术领域

本发明涉及材料生物学技术，尤其涉及血影紫杉醇的制备及其对血管内皮和肿瘤细胞的毒性作用的应用。

背景技术

目前已上市的多种抗肿瘤药物中，紫杉醇因其抗肿瘤效果显著，广泛用于乳腺癌、卵巢癌等多种癌症的临床化疗治疗。但是紫杉醇因其极低水溶性，不利于临床应用，改进紫杉醇(PTX)剂型一直是研究的着重点。其中，红细胞作为一种新型药物递送系统，其独特的细胞构造可保护载体不被内源物质降解失活，且细胞膜的半透膜性质可以达到缓释药物的效果，维持血药浓度，增加循环和作用时间，从而提高抗肿瘤效果。红细胞属于自体细胞而具有更好的生物相容性和可降解性。而且在红细胞表面修饰多肽等物质(例如RGD，Arg-Gly-Asp精-甘-天冬氨酸)使其具有靶向能力。红细胞作为一种优势载体应用于药物投递被广泛研究，在临床给药中具有非常重要的意义。

目前采用红细胞作为PTX载体的研究中，大致分为两种装载方法：第一种，直接将PTX装载于红细胞，但是载药量过低，因为其制备方法是将PTX溶于水溶液中与红细胞孵育，通过低渗裂解法将PTX包被于红细胞；第二种，先将PTX与其他纳米材料制备成载药纳米颗粒后，再将这些颗粒用红细胞装载进行投递，这种方法较前种方法载药量提高，但是引入了外源物质，会激活机体的免疫反应。

发明内容

本发明的第一目的在于为疏水性药物在临床上的应用提供一个新的解决思路，采用助水溶剂体系解决疏水性化疗药物的装载问题，不同药物通过选择合适的助水溶剂增加其溶解度，提高抗肿瘤效果的同时，减少药物佐剂或是外源性载药载体的副作用。

本发明提供一种血影包被疏水性物质的组合物，所述疏水性物质为紫杉醇、阿霉素、顺铂、7-乙基-10-羟基喜树碱或坦螺旋霉素；所述血影包被疏水性物质；所述血影表面修饰PEG；所述PEG上面连接有RGD多肽，所述疏水性物质为晶体状。结合PEG后血影直径增大，可以说明PEG-脂肪已经插入血影细胞膜。

PTX要形成晶体，需要从溶解度高的溶液转换成溶解度低的溶液。PTX在细胞质膜内部是无法形成晶体的，因为紫杉醇处于疏水环境。PTX晶体的外形有多种，PTX量少时，形成颗粒状晶体，多时，形成针状晶体。

本发明的第二目的在于提供一种装载紫杉醇的血影递送载体，所获产品对新生血管内皮细胞和癌细胞具有高毒性。

一种紫杉醇新剂型——血影紫杉醇，所述血影包被浓度为10-20g/L浓度紫杉醇；所述血影表面修饰PEG；所述血影表面修饰RGD多肽，所述紫杉醇为晶体状。所述血影紫杉醇表面修饰大量聚乙二醇(PEG)，DEN显著提高PEG-脂质整合到细胞膜上的效率，提高载PTX血影的生物相容性。所述血影紫杉醇表面修饰RGD，增加靶向血管内皮和肿瘤细胞的效率，提高抗肿瘤活性。

所述血影紫杉醇制备方法中，采用助水溶剂——二乙基烟酰胺(DEN)作为紫杉醇(PTX)溶剂，极大提高PTX的溶解度，提升血影包被紫杉醇量；所述血影紫杉醇采用DEN孵育红细胞，制备包被高浓度(20g/L)PTX的血影，包封率为80％；所述血影紫杉醇包被紫杉醇晶体。

本发明的第三目的在于提高一种高效、快速的血影紫杉醇制备方法，包括以下步骤：

(1)制备无菌压积红细胞；