[发明专利]一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用

说明书

一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用，本发明涉及一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用。本发明的目的是要解决现有缺少水体污染指示性微生物的问题，本发明一株甲基营养型芽孢杆菌为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)牛1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2018年12月12日，保藏编号为CCTCC No.M2018884。本发明甲基营养型芽孢杆菌在河道水污染的监测与评估中的应用。甲基营养型芽孢杆菌牛1对BOD表现敏感，是能够反映水体受有机物污染情况的指示性生物，同时可作为水体环境质量监测的指标。本发明应用于环境微生物技术领域。

技术领域

本发明涉及一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用。

背景技术

水体富营养化是水体污染的普遍性问题，它是由于生物所需的氮、磷等营养物质过量流入水体中造成水体污染，通济河前期水质监测数据显示，该区域河道水质中氮为主要超标有机物，磷存在一定的超标风险，微生物作为水体中有机物的降解者对于污染河道水质质量状况起到了关键性作用，可以降解全部天然有机物和大部分的人工合成有机物，在水体污染控制中发挥了极大的作用。微生物群落结构、微生物种类及微生物数量等相关微生物指标会随水质环境的改变产生有规律的改变。因此微生物可以用来作为评价水体环境质量的指标及用来表征水质状况的指示性生物指标。

生化需氧量(BOD)是环境监测中一项重要指标。它是衡量水中有机污染物含量的综合指标。目前，国内外普遍采用BOD5标准稀释测定法，它是把水样充满在封闭的溶解氧瓶中，避光并在20℃的环境下培养5天，计算培养前后溶解氧的质量浓度之差，从而得知每升样品所消耗的溶解氧量，用BOD5表示。该方法操作繁琐，所需时间长，干扰因素多，对操作人员的技术要求较高且不能及时反映水质状况。

国内外对于水体污染物指示微生物研究较多的均为水体受粪便污染程度的指示微生物的研究。然而此项指标仅可作为卫生学的参考指标，对于非饮用水源的城市河道底泥污染物指示微生物的研究报道鲜见。

发明内容

本发明的目的是要解决现有缺少水体污染指示性微生物的问题，提供了一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用。

本发明一株甲基营养型芽孢杆菌为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus) 牛1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2018 年12月12日，保藏编号为CCTCC No.M2018884。

本发明一株甲基营养型芽孢杆菌在河道水污染的监测与评估中的应用。

本发明采用常州市城市河道通济河为采样点，于2014年7月采集通济河表层底泥，灭菌采样袋装集并用样品冷藏箱迅速带回实验室，底泥进行均化、除去杂物等处理，对底泥微生物进行分离和纯化：

一、梯度稀释涂布法

称取底泥10g(避免泥水)，加入到盛有90mL无菌蒸馏水的已灭菌的三角瓶中，放入振荡培养箱120r/min摇瓶2小时。在超净工作台中将菌悬液使用移液枪吸取1mL 依次稀释到装有9mL的已灭菌蒸馏水中，稀释梯度分别为10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6。将各稀释梯度的试管盖好试管塞上下摇匀后使用移液枪吸取100uL打到LB固体培养基中进行涂布。涂布时将已灭好菌的涂布棒蘸取一定量的酒精在酒精灯火焰上进行二次燃烧灭菌，待涂布棒温度降低后以十字交叉的方式在LB固体培养基上进行涂液，再以同一方向画圈的方式进行涂布，直至感觉到干涩感后即可认为涂布完毕。将各稀释梯度涂布平板放置37℃恒温培养箱中培养，培养24小时后观察结果。

二、细菌的分离与纯化