[发明专利]一种凝结芽孢杆菌的筛选方法

权利要求书

1.一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：凝结芽孢杆菌分离培养准备

取含凝结芽孢杆菌的样品与无菌水混合制成10^-1g/ml的凝结芽孢杆菌原液，将凝结芽孢杆菌原液稀释成10^-4～10^-5g/ml浓度梯度富集培养，制得凝结芽孢杆菌富集培养液；

步骤2：凝结芽孢杆菌的初步筛选

将不同浓度的凝结芽孢杆菌富集培养液分别放置在培养皿中倾斜培养；

步骤3：凝结芽孢杆菌的二次筛选

取初筛后的凝结芽孢杆菌培养皿划线培养，并取筛选后的菌株接种种子振荡离心培养，去除上清液，将凝结芽孢杆菌梯度溶液平板计数，然后用无菌培养液培养一段时间；

步骤4：凝结芽孢杆菌的测试分离

将平板上的凝结芽孢杆菌形成的菌落，分离纯化，得到凝结芽孢杆菌。

2.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤1中，所述凝结芽孢杆菌原液稀释浓度分别为0.6×10^-4g/ml、0.8×10^-4g/ml、0.5×10^-5g/ml和0.8×10^-5g/ml。

3.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌富集培养所需的物质为：每1L水取用蛋白胨13克、牛肉粉2.0克和氯化钠4.0克，pH值为7.4±0.1。

4.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤2和步骤3中所述培养条件均为在恒温培养箱中35℃±0.5℃培养2～4天。

5.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述培养皿清洗培养，倾斜的角度为15～25°，且不同浓度的凝结芽孢杆菌富集培养液的倾斜角度不同。

6.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述培养皿划线培养中划线操作步骤如下：

步骤1：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样；

步骤2：:将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰，右手持含菌的接种环，先在一个区域轻巧地划3～4条连续的平行线当作初步稀释的菌源；

步骤3：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，把接种环通过步骤2中的划线区域移至另一区域，随即在该区域轻巧地划上6～7条致密的平行线，接着再以同样的操作在其他区域划上更多的平行线；

步骤4：将划线后的平板至37℃倒置恒温培养2～3天。

7.根据权利要求6所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述划线时，每划好一部分区域后均要烧去接种环上的残余菌样。

8.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述种子振荡离心培养是将筛选后的菌株种子放置在水浴恒温振荡器中培养1～2天。