[发明专利]一种用于检测转基因大豆SHZD32-1的RPA引物和探针组合及现场快速检测方法

说明书

本发明提供了一种用于检测转基因大豆SHZD32‑1的RPA引物和探针组合及现场快速检测方法。通过对转基因大豆SHZD32‑1的转化体特异性序列设计RPA引物和探针，结合DNA快速提取方法以及通过荧光灯的照射直接判别检测结果，可在30分种内完成对转基因大豆SHZD32‑1的现场快速可视化检测。本发明无需特殊仪器，可以实现在非实验条件下(例如大豆种植基地)对核酸的快速、特异性检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其是涉及一种用于检测转基因大豆SHZD32-1的RPA引物和探针组合及现场快速检测方法。

背景技术

目前，转基因大豆是全球种植面积最大的转基因作物。我国是世界上消费转基因大豆量最大的国家。我国的转基因大豆主要依靠进口。因此，研发拥有我国自主产权的转基因大豆具有重要的意义。SHZD32-1耐草甘膦大豆(即耐除草剂大豆SHZD32-1)是由我国上海交通大学自主研发的转基因大豆，是利用农杆菌介导法将优化的耐草甘膦基因G10-EPSPS导入了栽培大豆品种豆32中获得转G10-EPSPS基因的耐草甘膦大豆。现阶段，SHZD32-1耐草甘膦大豆已拿到安全证书。未来，SHZD32-1可能是我国第一个进行商业化种植的转基因大豆，由于转基因管理和监控的需要，迫切需要建立针对转基因大豆SHZD32-1的方便、快捷的现场快速检测方法。

目前，聚合酶链式反应(PCR)是转基因检测的金标准方法，其检测灵敏度高，结果稳定可靠，成为目前最常用的转基因检测方法。然而，PCR检测方法，需要大型仪器，对场地及操作人员要求较高，无法满足转基因成分的现场检测的需要。另一种转基因成分快速检测方法是蛋白质试纸条方法，该方法是将特异的抗体交联到试纸条上，根据抗原与抗体特异性结合从而达到对转基因作物的检测。该方法操作简单，且耗时短。但蛋白质试纸条需要依赖特异性的抗体，而特异性抗体的获得和制备比较繁杂。另外，蛋白质试纸条只能针对转基因作物表达的外源蛋白质进行检测，而无法对转基因作物中常用元件如启动子和终止子进行检测，同时也无法对转基因作物的特定转化体进行检测鉴定。

恒温扩增技术是近些年兴起的核酸检测技术，如环介导等温扩增技术、链替换扩增技术、依赖解旋酶的等温扩增技术、核酸序列依赖扩增和重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase polymerase amplification，RPA)等。其中RPA技术的扩增温度为37℃左右，其扩增效率高，一般20分钟能完成扩增，而且其对检测样品的纯度要求不高，具有一定抗抑制因子的能力。RPA技术的这些特性，展现了其在转基因成分现场快速检测方面的广阔前景。

然而，目前主要有两个问题制约恒温扩增技术在现场检测方面的应用，一是核酸的快速提取，二是快速扩增与结果判别。一方面，传统的核酸提取方法操作繁杂，耗时费力，即使是常用的核酸提取试剂盒，其提取的时间也在1个小时左右，而且还需要离心机等设备，不能满足现场快速检测的需要。另一方面，恒温扩增技术虽然保证了核酸的快速扩增，但其与后期结果判别不能很好连接，目前常在扩增后添加荧光染料，这一方面增加操作步骤，也增加了气溶胶污染的风险；还有就是利用荧光仪器对扩增信号进行检测。这些方法都不能完好的切合现场快速检测的需要。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测转基因大豆SHZD32-1的RPA引物和探针组合及现场快速检测方法。通过对转基因大豆SHZD32-1的转化体特异性序列设计RPA引物和探针，结合DNA快速提取方法以及通过荧光灯的照射直接判别检测结果，可在30分种内完成对转基因大豆SHZD32-1的现场快速可视化检测。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种用于检测转基因大豆SHZD32-1的RPA引物和探针组合，所述引物包括正向引物和反向引物；

所述正向引物和所述反向引物分别选自以下的任一组：