[发明专利]去氢表雄酮粗品的纯化方法及去氢表雄酮的定量检测方法

说明书

本发明涉及一种去氢表雄酮粗品的纯化方法及去氢表雄酮的定量检测方法；在该纯化方法中，将去氢表雄酮粗品与有机溶剂混合，制得样品溶液，然后采用液相色谱法对样品溶液进行分离，得到纯化的去氢表雄酮；其中，液相色谱法采用的色谱柱为烷基柱，所采用的流动相为体积比为(20～60):(40～80)的磷酸铵盐水溶液和乙腈。去氢表雄酮粗品中的杂质与去氢表雄酮在特定的流动相环境中，去氢表雄酮和包括其异构体在内的杂质与流动相的极性相差较大，因此其各自在色谱柱中的保留时长差异较大，能使去氢表雄酮和包括其异构体在内的杂质达到分离，从而提高去氢表雄酮的纯度。

技术领域

本发明涉及药物合成制备技术领域，特别涉及一种去氢表雄酮粗品的纯化方法及去氢表雄酮的定量检测方法。

背景技术

去氢表雄酮，英文名称：Dehydroepiandrosterone，化学名：3β-羟基-5-雄烯-17-酮，分子式为C₁₉H₂₈O₂。去氢表雄酮是用于制造甾体药物的重要中间体和原料，同时具有延缓衰老、保持青春活力、增强体能，改善情绪和睡眠、提高记忆力、调节免疫系统功能以及提高肌体免疫力等功效。在制备药物时，对去氢表雄酮的纯度及纯度的准确度要求很高。去氢表雄酮的主要制备方法为利用植物甾醇发酵产物雄烯二酮(4-AD)为原料再经过酯化、缩酮、还原、水解来合成去氢表雄酮，该制备方法产率高。然而，该制备工艺中会产生大量的副产物，例如第三步还原反应采用硼氢化钠进行还原，还原过程产生异构体杂质，经过水解后变成α-异构体；酯化或缩酮反应过程中也会产生副产物或原料本身由于未反应完全作为杂质残留在产物去氢表雄酮中，导致去氢表雄酮的纯度降低。传统的提纯方法集中在如何分离去氢表雄酮的α-异构体上，但还是有其他不明杂质残留在去氢表雄酮中，从而降低去氢表雄酮的纯度，影响去氢表雄酮含量测定的准确度，不利于去氢表雄酮的应用。

因此，开发一种有效分离去氢表雄酮粗品中的杂质的提纯方法具有重要意义。

发明内容

基于此，本发明提供一种去氢表雄酮粗品的纯化方法及去氢表雄酮的定量检测方法，该纯化方法能有效分离去氢表雄酮粗品中的杂质，包括α-异构体和其他不明杂质，从而对去氢表雄酮粗品进行高效除杂。

本发明提供一种去氢表雄酮粗品的纯化方法，包括以下步骤：

将去氢表雄酮粗品与有机溶剂混合，制得样品溶液；

采用液相色谱法对样品溶液进行分离，得到纯化的去氢表雄酮；

其中，所述液相色谱法采用的色谱柱为烷基柱，所采用的流动相为体积比为(20～60):(40～80)的磷酸铵盐水溶液和乙腈。

在其中一些实施例中，所述流动相由体积含量20％～60％的磷酸铵盐水溶液和体积含量40％～80％乙腈组成。

在其中一些实施例中，所述液相色谱法采用的洗脱程序如下：

在0～10min，所述流动相中磷酸铵盐水溶液的体积含量为60％，乙腈的体积含量为40％；

在10～35min，所述流动相中磷酸铵盐水溶液的体积含量从60％降至20％，乙腈的体积含量从40％提高至80％；

在35～43min，所述流动相中磷酸铵盐水溶液的体积含量为20％，乙腈的体积含量为80％；

在43～44min，所述流动相中磷酸铵盐水溶液的体积含量从20％提高至60％，乙腈的体积含量从80％降至40％；

在44～50min，所述流动相中磷酸铵盐水溶液的体积含量为60％，乙腈的体积含量为40％。

在其中一些实施例中，所述去氢表雄酮粗品为采用雄烯二酮经酯化、缩酮、还原和水解制得的。