[发明专利]一种尿导管表面大肠埃希菌DNA定量检测用引物组在审
| 申请号： | 202011258091.0 | 申请日： | 2020-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN112280833A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 杨洁;常庆;沈丽娟;侯剑刚;彭晓琼;钱玮;王政平 | 申请（专利权）人： | 上海市嘉定区中心医院(上海健康医学院附属嘉定区中心医院;上海交通大学医学院附属仁济医院嘉定分院) |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海太优知识产权代理事务所(普通合伙) 31352 | 代理人： | 周长兴 |
| 地址： | 201800 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 导管 表面 大肠 埃希菌 dna 定量 检测 引物 | ||
1.一种尿导管表面大肠埃希菌DNA定量检测用引物组，每个LAMP引物组由外引物对F3/B3、内引物对FIP/BI和环引物对环F/环B组成，F3、B3、FIP、BI、环F、环B具体如下：
2.利用权利要求1所述的引物组检测尿导管表面大肠埃希菌的方法，包括以下步骤：
1)提取DNA；
2)配制LAMP检测反应体系，反应体系包括引物F3、B3、FIP、BI、环F、环B；
3)将提取的DNA加入引物组和LAMP检测反应体系进行LAMP扩增反应，肉眼观察浊度，或利用实时浊度仪实时监测核酸扩增反应过程，以图文形式显示整个反应过程中各个反应的速率和时间。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤1提取DNA，是将导尿管表面的擦拭棉签以分子级无DNA酶无菌水中洗涤两次，16,000×g离心5分钟，将沉淀重新悬浮并在分子级无DNA酶无菌水中洗涤两次，99℃加热15分钟，以16,000×g离心5分钟以沉淀细胞碎片，将上清液用作LAMP测定。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤2的LAMP检测反应体系为：Bst DNA聚合酶4U、dNTPs200μM、甜菜碱0.8M、MgSO42mM、DNA荧光染料、缓冲液、蒸馏水。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤3的LAMP扩增反应是将DNA抽提液2ul加入引物组8ul和LAMP检测反应体系15ul于65度扩增60分钟。
6.利用权利要求1所述的引物组检测尿导管表面大肠埃希菌的快速定量检测试剂盒，所述试剂盒至少包括含有权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的LAMP检测反应体系。
7.根据权利要求6所述的快速定量检测试剂盒，其中，LAMP检测反应体系为：Bst DNA聚合酶4U、dNTPs200μM、甜菜碱0.8M、MgSO42mM、DNA荧光染料、缓冲液、蒸馏水。
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