[发明专利]一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法

说明书

本发明公开了一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法。本发明提供的一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，利用未成熟的白木通种子为外植体进行诱导体细胞胚，主要有以下优点：1）未成熟种子的合子胚具有较高的细胞全能性，比较容易诱导体细胞胚胎发生过程，其次未成熟种子在果肉中处于一种相对无菌环境，组培染菌率低；2）诱导体细胞胚胎发生起始过程以及继代增殖均不需要添加任何外源植物激素，在MS培养基中便可进行起始诱导和继代增殖；3）通过体细胞胚胎发生途径，体细胞胚增殖效率高，在短时间内可获得大量白木通无菌苗；4）诱导出的体细胞胚能发育成完整的植株，体细胞胚为单细胞起源，具有嵌合率低、变异率低等优势。

技术领域

本发明属于白木通组织培养领域，具体涉及一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法。

背景技术

白木通（Akebia trifoliata ssp. australis）为木通科（Lardizabalaceae）木通属（Akebia）的多年生木质藤本植物。我国是白木通的分布中心，其分布范围十分广泛，北至陕西、山西、河南，南至云南、广东、广西。其果实通常在农历八月成熟，成熟时果皮沿腹线裂开，因此也被成为“八月瓜”、“八月炸”，又因其形似野生香蕉，也被称为“野香蕉”等。白木通果实不仅美味多汁、香甜可口，还含有丰富的可溶性糖、淀粉、粗蛋白、粗纤维、Vc、矿物质以及17种氨基酸等营养元素（李丽等，2010）。白木通作为传统中药材在我国已有两千多年的应用历史，其根、茎、叶、果均可入药，具有消炎利尿、除湿镇痛、通经下乳等功效。目前白木通已经作为一种药食两用的新型水果进行了综合开发利用，市场对于白木通优良种苗的规模化生产提出了巨大需求，而目前白木通种苗多来自野生资源，种苗品质参差不齐，难以满足市场需求。

在白木通优良种苗生产中可以利用扦插法，但存在成活率低，生根困难，生产受季节影响大等问题，因此通过组织培养是进行种苗规模化生产以及获得脱毒苗的重要途径。申请号为“CN201510334457.0”的专利申请公开了一种白木通快速繁殖的方法，将白木通带芽茎段进行消毒处理后，转入培养基中诱导腋芽，将诱导出的腋芽切下并转移到增殖培养基中，获得的健壮增殖腋芽接种到生根培养基中进行诱导生根，将获得的幼苗进行炼苗并移栽。该方法主要包括外植体的消毒、初代培养、增殖培养、生根培养及炼苗移栽等环节，该体系利用白木通带芽茎段为外植体存在脱毒率低，存在易褐化，增殖效率低等问题。

体细胞胚胎发生（somatic embryogenesis，SE）是植物体细胞再生双极结构并发育成体细胞胚的过程，是一种植物重要的再生途径。在植物组织培养中，通过愈伤组织诱导幼苗通常需要三到四步来诱导产生芽和根，而体细胞胚胎发生的体外诱导可以通过体细胞直接诱导成幼苗，因此体细胞胚胎发生途径是一种简单便捷，快速高效的途径。然而通过体细胞胚胎发生途径诱导幼苗因物种不同而有较大差异，许多植物通过该途径诱导不出幼苗或者效果较差，目前关于白木通通过体细胞胚胎发生途径诱导幼苗还未见相关报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有白木通组培技术的染菌率高，增殖效率低等问题，提供一种简单高效的获得白木通无菌苗的方法。

本发明通过以下技术方案解决上述技术问题，

一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其步骤包括，

（1）摘取7-8月份未成熟的白木通果实，经处理，从果肉中取出未成熟的种子；

（2）将未成熟种子沿背腹线纵切成半，将种子切面朝上放置于MS固体培养基中进行诱导体细胞胚胎发生，获得诱导体细胞胚；

（3）将诱导出的体细胞胚转移至MS固体培养基中进行继代增殖培养，获得增殖体细胞胚；

（4）将增殖体细胞胚转移至成苗培养基中诱导成苗；

（5）将获得的幼苗进行炼苗，炼苗后进行移栽，进而获得白木通再生苗。