[发明专利]核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法及应用

权利要求书

1.核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备核壳二氧化钛纳米颗粒材料；

2)将步骤1)所得的核壳二氧化钛纳米颗粒材料加到25mL无水乙醇中并分散均匀，然后加入0.25-1.00mL 3-氨基丙基三甲氧基硅，将混合物剧烈搅拌6小时，然后过滤并洗涤，得到APTMS-修饰的TiO₂；将其在搅拌下再分散至HAuCl₄·3H₂O和乙醇的混合物中8-24小时，取沉淀物用乙醇洗涤，而后在90℃下烘干过夜；而后在500℃下保温4-8h，得到Au/TiO₂；

3)将步骤2)所得的Au/TiO₂分散到2-10mL无水乙醇中，超声震荡使其分散均匀，得到Au/TiO₂溶液；取150μL浓度为10^-7mmol/L的啶虫脒适配体链溶液，添加到1.5-5mL所述Au/TiO₂溶液中，搅拌1小时，而后放入冰箱过夜，得到啶虫脒适配体链溶液；

4)将裸GC电极用Al₂O₃粉末摩擦抛光成镜面，抛光结束后，先用超纯水冲洗掉表面的Al₂O₃，再用无水乙醇冲洗三次，最后将其放在超纯水中超声清洗1min，而后立即用吹风机干燥；连接好三电极体系，将其置入1％氯金酸溶液中，在+0.1V的电压下进行恒电位扫描，扫描时间为90s，制备Au/GC电极；取10μL浓度为10^-7mmol/L的啶虫脒互补链滴在完成镀金的Au/GC电极上，在室温下晾干，然后再移取8-20μL浓度为10μmol/L的6-巯基己醇滴涂于已修饰的电极表面，然后放入冰箱孵化一整夜；取10-20μL浓度为1μmol/L所述啶虫脒适配体链溶液，滴在孵化好的电极上，37℃孵化1-2小时，之后滴加啶虫脒农药，接着37℃孵化1-2小时，即得到所述核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器。

2.根据权利要求1所述的核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于，还包括以下步骤5)：连接三电极，参比电极、辅助电极、工作电极分别以饱和甘汞电极、铂电极、所述核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器充当；以pH 7.6的磷酸缓冲溶液配制0.1M的过硫酸钾溶液作为底液，用MPI-B型多参数化学发光分析测试系统电化学分析仪进行电致发光的测定，并记录数据。

3.根据权利要求2所述的核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于，所述pH 7.6的磷酸缓冲液是由以下方法配制的：取0.2mol/L的磷酸二氢钠溶液13.0mL，0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液87.0mL，称取氯化钠固体1.70g，混匀溶解，然后转移到200mL容量瓶中，清洗烧杯3次，洗液也转移到容量瓶，最后定容，摇匀。

4.根据权利要求2所述的核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于，所述0.1M的过硫酸钾溶液是由以下方法配制的：分别称取磷酸二氢钾0.12g、磷酸氢二钠0.72g、氯化钠4.01g、氯化钾0.10g、过硫酸钾13.50g，溶解于400mL水中，然后完全转移到500mL容量瓶中，混匀并定容。

5.根据权利要求1所述的核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于，步骤1)中：所述搅拌是利用磁力搅拌实现的；所述密闭容器是高压釜；所述200℃下保持10小时，是将所述高压釜放置在马弗炉中实现的；在洗涤过程中对固相的收集是通过离心实现的。

6.根据权利要求1所述的核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于，步骤2)中：所述取沉淀物用乙醇洗涤，此过程中对固相的收集是通过离心实现的；所述90℃下烘干过夜，是在恒温干燥箱中进行的。

7.根据权利要求1所述的核壳二氧化钛纳米颗粒修饰DNA传感器的构建方法，其特征在于，步骤2)中，所述在500℃下保温4h，包括以下步骤：将烘干过夜后的产物放入坩埚，堆为斜坡状，放入马弗炉中，设置参数为500℃保温4小时。