[发明专利]基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法，试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；所述乳胶微球垫上包被有乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体作为检测线，以及包被有重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体作为质控线。本发明乳胶微球免疫层析试纸条采用双抗体夹心免疫法检测新型冠状病毒，具有较好的敏感性、特异性、重复性和稳定性，对目标化合物的回收率较高，检验结果准确可靠；实现了新型冠状病毒的单人份快速定性检测，且灵敏度高，批内、批间差异小，为临床使用提供了极大便利。

技术领域

本发明涉及一种多样本的快速定性检测试纸条及制备方法，尤其是利用免疫乳胶微球层析技术测定血液、血清、唾液、粪便等多样本中新型冠状病毒抗原的快速定性检测试纸条及其制备方法。

背景技术

目前COVID-19的检测方法主要是针对鼻咽部分泌物或采集血液进行病毒核酸RT-PCR检测为主，肺部X光为辅，但由于病毒RNA容易降解，测定结果易受样品采集和处理的影响。此外，虽然核酸检测方法敏感度较高，但要求生物安全II级实验室以及需昂贵的实验设备和专业的技术人员，由于检测能力的限制导致目前新型冠状病毒疑似病例远远高于确诊病例；同时，导致偏远地区的疑似样本必须送到专门的实验室进行核酸检测，运输过程中温度等不可控因素降低了样本的质量易造成假阴性，且运输距离和时间的增长也增加了病毒传播的可能性。除了核酸检测，还有对新型冠状病毒IgM/IgG抗体血清学的检测，该方法操作简便，快速，无需仪器设备，适合现场筛查。但是由于个体差异导致体内IgG/IgM浓度不尽相同，造成检测抗体血清学试验作为早期诊断方法容易出现假阴性。因此，建立一种克服体内早期抗体不足，且检测时间短、操作简单、灵敏度高、特异性高以及易于大规模推广的COVID-19测定方法，对患者提供早期、准确的实验室诊断是可行而必要的。

发明内容

为了解决新型冠状病毒大量的检测需求，本发明提供一种基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法，本发明是申请人对其在先申请，2020106817702检测新型冠状病毒的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法的进一步改进，试纸条采用乳胶微球，双抗体夹心免疫法制备。乳胶微球灵敏度比胶体金更高，因此最低检测线也更低。同时乳胶微球属于化学键的连接，也更加的稳定。同时，针对新型冠状病毒抗原的检测不同于之前的申请，抗原不仅只存在于人体血液中，还可能存活于空气、食品、粪便中，可以有效扩大检测范围。

实现本发明目的的技术方案是：

第一方面，本发明提供一种基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条，包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；

所述乳胶微球垫上包被有乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体；

所述硝酸纤维素膜上包被有重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体作为检测线，以及包被有重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体作为质控线。

所述乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体的浓度为3-18μg/mL，其在乳胶微球垫上的包被量为200uL；

所述重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体的浓度为0.5-3mg/ml，包被量为30uL；

所述重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体的浓度为0.5-3mg/ml，包被量为30uL。

所述乳胶微球垫上还包括分离剂，所述分离剂为酪蛋白、BSA或PEG6000(聚乙二醇6000)中的任意一种或至少两种的组合，优选为浓度10％的PEG6000。

发明人发现在乳胶微球垫上加入分离剂，使得重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体与乳胶微球颗粒的结合更加稳定，进一步降低了乳胶微球免疫层析试纸条的检测限，不仅如此，相比于BSA和酪蛋白，采用所述PEG6000作为分离剂时，乳胶微球标记物的复溶性和检测性能会进一步提升。

所述乳胶微球垫上的乳胶微球颗粒的粒径为300-400nm。