[发明专利]检测新冠疫苗注射后体内中和抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测新冠疫苗注射后体内分泌中和抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；所述胶体金垫上包被有胶体金标记的重组新型冠状病毒RBD蛋白；所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2（ACE2）检测线，以及包被有鼠抗鸡IgG抗体作为质控线。本发明胶体金免疫层析试纸条采用竞争法检测人体内中和抗体，具有较好的敏感性、特异性、重复性和稳定性，对目标化合物的回收率较高，检验结果准确可靠。实现了注射新冠疫苗后对人体内的中和抗体快速定性检测，且灵敏度高，批内、批间差异小，为临床使用提供了极大便利。

技术领域

本发明涉及一种血液样本的快速定性检测试纸条及制备方法，尤其是利用免疫胶体金层析技术测定人体注射新冠疫苗后全血或血清中中和抗体的快速定性检测试纸条及其制备方法。

背景技术

目前还没有专门针对COVID-19的特效药，新冠疫苗便成了预防COVID-19的有效手段。当前，我国新冠疫苗研发工作总体上处于领先地位，每条技术路线都有进入临床阶段的疫苗，其中灭活疫苗和腺病毒载体疫苗，两种技术路线共4个疫苗进入了三期临床。随着后续疫苗的进一步成功，验证新冠疫苗的有效性便成为一大需求。因此，建立一种检测时间短、操作简单、灵敏度高、特异性高以及易于大规模推广的注射疫苗后人体内中和抗体测定方法，对患者提供早期、准确的实验室诊断是可行而必要的。

发明内容

为了检测注射新冠疫苗后人体是否产生相应抗体的需求，本发明提供一种快速定性检测注射新冠疫苗后人体内中中和抗体的快速胶体金免疫层析试纸条，所述胶体金免疫层析试纸条通过实际样本中的中和抗体与硝酸纤维素膜上包被的血管紧张素转化酶2（ACE2）竞争，有效的定性检测注射新冠疫苗后人体内是否含有中和抗体这一问题。并且所述试纸条具有较好的敏感性、特异性、重复性和稳定性，对目标化合物的回收率较高，能提供更准确可靠的检验结果。

实现本发明目的的技术方案是：

第一方面，本发明提供一种检测新冠疫苗注射后体内分泌中和抗体的胶体金免疫层析试纸条，包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；

所述胶体金垫上包被有胶体金标记的重组新型冠状病毒RBD蛋白；

所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2（ACE2）检测线，以及包被有鼠抗鸡IgG抗体作为质控线。

所述胶体金标记的重组新型冠状病毒RBD蛋白的浓度为500μg/mL-5mg/mL，其在胶体金垫上的包被量为 400uL；

所述血管紧张素转化酶2（ACE2）的浓度为0.5-2.6mg/ml，包被量为30uL；

所述鼠抗鸡IgG抗体的浓度为0.5-3mg/ml，包被量为30uL。

所述胶体金垫上还包括分离剂，所述分离剂为酪蛋白、BSA或PEG6000中的任意一种或至少两种的组合，优选为浓度10％的PEG6000。

发明人发现在胶体金垫上加入分离剂，使得重组新型冠状病毒RBD蛋白与胶体金颗粒的结合更加稳定，进一步降低了胶体金免疫层析试纸条的检测限，不仅如此，相比于BSA和酪蛋白，采用所述PEG6000作为分离剂时，金标物的复溶性和检测性能会进一步提升。

本发明，所述新冠病毒鼠抗人抗体隐球菌抗体为抗隐球菌荚膜多糖重组新冠抗原的单克隆抗体和/或抗隐球菌荚膜多糖重组新冠病毒抗原的多克隆抗体，优选为重组新冠病毒抗原抗隐球菌荚膜多糖抗原的单克隆抗体。

所述胶体金垫上的胶体金颗粒的粒径为30-40nm。

所述检测线的距离为3-5cm，检测线与质控线的距离为3-5cm，检测线和质控线相互不受干扰。

所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜；所述胶体金垫为玻璃纤维膜。