[发明专利]一种手性多巴检测专用纸芯片及检测分析方法

权利要求书

1.一种用于手性多巴测定的纸质微流控芯片，其特征在于：所述的微流控芯片的纸基采用空隙率低、孔径小、且分布均匀的色谱纸，在色谱纸上用打孔器进行打孔，打出实验所用的圆形纸芯片；所述的纸基孔隙率在65～85％之间；所述的纸基孔径在10μm～11μm之间；所述的色谱纸为：厚度180μm，基本重量88g/m²，空气流速10.5s/100mL/in²，灰份含量0.06％，拉伸模量39.1N/15mm，最低α-纤维素含量98％的纤维素纸。

2.一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：采用打孔器在色谱纸上进行打孔，打出实验所用的圆形纸芯片；

步骤2：检测前配制氯金酸溶液、柠檬酸钠溶液、L-半胱氨酸溶液、磷酸缓冲液和L-多巴溶液；

步骤3：制备纳米金；

步骤4：L-半光氨酸(L-Cys)修饰纳米金；

步骤5：分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件；

步骤6：检测前制作左旋多巴标准曲线；

步骤7：最低检测限测定；

步骤8：加样回收实验；

步骤9：重复性实验；

步骤10：实际样品测定。

3.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：结合步骤1、2、3、4、5、6，分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件。

4.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤7中所述的“最低检测限试验”具体如下：

配制不同浓度的L-多巴溶液，在纸芯片上进行检测，随行空白校正，显色后，用Photoshop软件分析L-多巴与空白的Red通道和Blue通道的mean值，得到最低检测限为0.004mmol/L。

5.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤8中所述的“加样回收实验”具体如下：

分别配制0.02、0.04、0.08mmol/L的L-多巴溶液标准品，依次加入所含L-多巴80％、100％、120％的对照品，在纸芯片上进行测定，得到低、中、高浓度时，纸芯片的加样回收率分别为99.0％、98.2％、101.0％，在98.21％-101.05％之间，工作曲线的准确性良好。

6.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤9中所述的“手性多巴检测的重复性实验”具体如下：

配制浓度为0.02、0.04、0.06mmol/L L-多巴溶液在纸芯片上进行测定，随行空白实验，得到不同浓度的L-多巴的日内精密度为3.13％，日间精密为3.82％。实验结果在5％以内，重复性良好。

7.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤10中所述的“实际样品测定”具体如下：

配制浓度为0.04、0.06、0.08mmol/L的DL-多巴溶液，在纸芯片上测定其中左L-多巴的含量，其中L-多巴的理论含量为50％，检测结果得DL-多巴中L-多巴的含量为50.57％、52.12％、52.07％，L-多巴浓度检测结果与标注值误差在±5％内。

8.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤中3、4具体操作如下：

对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行紫外可见光谱扫描得空白纳米金的最大吸收波长为518nm，吸光度为0.5446，L-Cys修饰纳米金的最大吸收波长为520nm，吸光度0.5434，出现红移，说明纳米金被L-Cys成功修饰；对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行粒径测定，空白纳米金的平均粒径是36.57nm(n＝3)，L-Cys修饰纳米金的平均粒径是47.49nm(n＝3)，粒径增大，可证明L-Cys已成功修饰到纳米金表面；对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行电位测定，空白纳米金的平均电位是-7.24mV，L-Cys修饰纳米金的平均电位是-14.7mV，电位降低，可以进一步证明纳米金被L-Cys修饰。