[发明专利]一种在大肠杆菌中表达的有机磷水解酶基因组及其应用在审
申请号: | 202011239856.6 | 申请日: | 2020-11-09 |
公开(公告)号: | CN112342223A | 公开(公告)日: | 2021-02-09 |
发明(设计)人: | 许晶;田永生;王波;高建杰;王丽娟;李振军;彭日荷;姚泉洪 | 申请(专利权)人: | 上海市农业科学院 |
主分类号: | C12N15/53 | 分类号: | C12N15/53;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C02F3/34;C12R1/19;C02F101/34;C02F101/38 |
代理公司: | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人: | 张晓敏;费开逵 |
地址: | 201106 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 大肠杆菌 表达 有机磷 水解 基因组 及其 应用 | ||
1.一种在大肠杆菌中表达的有机磷水解酶基因组,包括源于黄杆菌并按大肠杆菌的密码子偏好性优化后获得的OpdS基因、源于假单胞菌并按大肠杆菌的密码子偏好性优化后获得的PnpAS、PnpBS、PnpCS、PnpDS和PnpES基因。
2.根据权利要求1所述的有机磷水解酶基因组,其特征在于,所述OpdS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;PnpAS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;PnpBS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示;PnpCS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示;PnpDS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示;PnpES基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
3.如权利要求1所述的基因组合在大肠杆菌中的应用。
4.一种多基因大肠杆菌转化载体,包括大肠杆菌表达载体,以及源于黄杆菌并按大肠杆菌的密码子偏好性优化后获得的OpdS基因、源于假单胞菌并按大肠杆菌的密码子偏好性优化后获得的PnpAS、PnpBS、PnpCS、PnpDS和PnpES基因分别与T7启动子和终止子融合的基因表达盒。
5.根据权利要求4所述的多基因大肠杆菌转化载体,其特征在于,所述大肠杆菌表达载体为pET-28a。
6.一种可完全降解有机磷农药的转基因大肠杆菌的制备方法,包括以下步骤:
1)根据大肠杆菌的密码子偏好性,对源于黄杆菌的Opd基因、源于假单胞菌的PnpA基因、PnpB基因、PnpC基因、PnpD基因和PnpE基因按大肠杆菌表达模式优化,优化后分别获得OpdS基因、PnpAS基因、PnpBS基因、PnpCS基因、PnpDS基因和PnpES基因,利用重叠延伸PCR技术,将优化后获得的六段基因分别与T7启动子和终止子融合,分别构建基因表达盒;
2)将步骤1)中构建的六个基因表达盒连接入大肠杆菌表达载体,获得含OpdS、PnpAS、PnpBS、PnpCS、PnpDS和PnpES六基因表达盒的多基因大肠杆菌转化载体;
3)将步骤2)所述多基因大肠杆菌转化载体转入大肠杆菌,获得能完全降解有机磷农药甲基对硫磷和甲基对氧磷的大肠杆菌。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述OpdS基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示;PnpAS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;PnpBS基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示;PnpCS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示;PnpDS基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示;PnpES基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤1)中,所述T7启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示;所述T7终止子序列如SEQ ID NO.8所示。
9.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中,所述大肠杆菌表达载体为pET-28a。
10.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤3)中,所述大肠杆菌为BL21-AI。
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