[发明专利]一种DNA样本保存液及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种DNA样本保存液及其制备方法与应用。所述DNA样本保存液包括如下组分：弱碱1‑10g/L、EDTA盐0.1‑5g/L、抗氧化剂0.1‑1g/L、烷基硫酸盐0.1‑10w/v％、防腐剂0.1‑5v/v％、硫醇类还原剂5‑50mmol/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.1‑2v/v％，其余部分包括水。本发明制备的DNA样本保存液组分简单、含量少、制造成本低、容易批量生产和采样，不会抑制后续的检测分析；保存生物样品的时间长，可长达1年之久；同时DNA样本保存液独有的配方通过有效的配比与之间的协同作用，保证样品可以直扩，不会抑制下游的PCR反应。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种DNA样本保存液及其制备方法与应用。

背景技术

现有技术中，口腔DNA样本的采集主要采用棉签拭子获取口腔黏膜上皮细胞的方式来进行。口腔拭子采集的样本中，除脱落的上皮细胞外，还含有大量细菌、DNA酶、RNA酶、粘蛋白、球蛋白、消化酶和白蛋白等各类消化相关物质。若拭子样本直接常温下放置较长一段时间，黏附的多种有机物的存在容易滋生大量微生物，细菌在25℃及以上的温度环境中，繁殖迅速，且在DNA酶的分解下，DNA迅速降解。这个过程增加样本污染和DNA降解的风险，从而影响后续检测和分析。

通过把采集的口腔拭子置于相应的拭子保存液中可以大大增加样本保存过程中的稳定性，延缓样本DNA的降解。已有口腔拭子保存液专利中，其保护剂成分大多较为复杂：专利CN102440234A和CN105368812A中分别含有强蛋白质变性剂异硫氰酸胍和尿素，虽然可以将口腔中的消化酶、核酸酶等有机物质进行变性处理，抑制核酸酶的活性，但同时也会对裂解细胞，使得DNA处于游离状态，不利于DNA的完整性保存；专利CN102919218A中含有氯化镁，镁离子是核酸酶激活剂，容易引起DNA的降解，不利于DNA的稳定性和完整性的保存；专利CN102676501A和CN105039306A中含有微生物生长所需的糖成分，虽然可以很好地保持该保存液中细胞的渗透压，但更容易引起细菌等微生物的滋生；专利CN111139235A中含有氯化钠和蛋白酶K，采集的样本需要提取过硅胶吸附柱、磁珠吸附等，操作较繁琐；专利CN109691432A中含有氯化钠维持细胞的渗透压，主要便于细胞的保存和运输，可以保护基因组在数周内不被破坏，保存样本的时间较短；专利公布号CN111183973A中含有尿素、褐藻酸钠和左旋肉碱，成分较复杂，同时采集的样本也需要提取，操作较繁琐。以此，开发一种简单、有效的保存DNA样本的保存液是亟待解决的问题。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种DNA样本保存液及其制备方法与应用，以克服现有技术的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种DNA样本保存液，其包括如下组分：弱碱1-10g/L、EDTA盐0.1-5g/L、抗氧化剂0.1-1g/L、烷基硫酸盐0.1-10w/v％、防腐剂0.1-5v/v％、硫醇类还原剂5-50mmol/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.1-2v/v％，其余部分包括水；其中，所述弱碱包括有机弱碱和/或无机弱碱；所述有机弱碱包括三羟甲基氨基甲烷、乙醇胺、三乙醇胺、甘氨酸、有机酸碱金属盐中的任意一种或两种以上的组合，且不限于此；所述无机弱碱包括碱金属的碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硼酸盐中的任意一种或两种以上的组合，且不限于此；所述抗氧剂包括尿酸、尿酸盐、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)中的任意一种或两种以上的组合，且不限于此，优选为尿酸和/或尿酸盐；所述硫醇类还原剂包括三(2-羧乙基)膦(TCEP)。

本发明实施例还提供了前述的DNA样本保存液的制备方法，其包括：

将弱碱、EDTA盐、抗氧化剂、烷基硫酸盐、防腐剂与水混合形成溶液，之后向所获溶液中加入硫醇类还原剂、聚乙二醇辛基苯基醚、水混合均匀，形成所述DNA样本保存液。

本发明实施例还提供了前述的DNA样本保存液于保存DNA样本中的用途。